Ампульная биозавивка что это: Ампульная биозавивка что это

Ампульная биозавивка что это

Биозавивка волос — технология исполнения и рекомендации по уходу

Из маловыразительного полотна прямых волос создать роскошную массу экспрессивных локонов, кудрей и завитков без малейшего ущерба для прядей, сохранив и приумножив их жизненную силу- эти задачи успешно выполняет биозавивка.

Процедура, не так давно бывшая инновацией, прочно вошла в спектр услуг парикмахерских салонов и преображает, лечит, интенсивно восстанавливает, защищает волосы.

Виды биозавивок волос

Самые нужные методики биозавивки различаются формулой состава и интенсивностью его воздействия, это позволяет применять их на волосах разной длины и получать завиток определённой плотности.

• Японская завивка, которая используется для длинных и средних прядей, позволяет получить локоны средней упругости. В качестве ухаживающих компонентов в составе – протеины шёлка, экстракт зелёного чая, натуральный коллаген, липидный комплекс.
• Состав с протеинами шелка обеспечивает самое щадящее и деликатное воздействие на волосы. Использование шёлковой завивки особенно эффективно для безжизненных тусклых волос: в результате получаются мягкие, эластичные волны, наполненные сиянием. Эту методику часто применяют для коррекции неудачной химической завивки.
• Итальянская завивка подходит для повреждённых, ослабленных волос, оказывая на них лечебное и восстанавливающее действие экстрактом бамбука, входящим в состав. Красивые, упругие, мелкие завитки сильной фиксации “итальянки” великолепно смотрятся на коротких волосах.

Классифицируют способы завивки и по размеру завитков, создающих определённый объём.

• Для светлых и обесцвеченных волос идеальным решением будут “кудри ангела”, придающие причёске необыкновенно воздушный, эфемерный вид.
• Органично и натурально выглядит результат крупной биозавивки – масса кудрей с естественным, живым объёмом.
• Романтичный и нежный образ создают мягкие струящиеся завитки, которые называют “голливудской волной”.
• Красиво спадающие, хорошо структурированные локоны получаются в результате вертикальной завивки, когда волосы накручиваются по спирали на вертикально расположенные относительно головы бигуди. Выразительными получаются кудри на длинных волосах.
• При спиральной завивке пряди накручиваются на коклюшки, которые располагаются в горизонтальной плоскости по отношению к голове. Часто метод используют для коротких и средних волос.
• Карвинг – прекрасная возможность придать волосам дополнительный объём волосам за счёт лёгкой волнистости. Причёска приобретёт живой и натуральный вид, если в процессе биозавивки будут одновременно использоваться коклюшки разного диаметра.
• Формируют XL-объём мелкие, плотные и стойкие завитки в афростиле.

процедура как химическая завивка на короткие волосы является актуальной, потому что ее обладательнице больше не нужно думать о ежедневных укладках.

Технология проведения химической завивки волос в домашних условиях описана тут.

Чтобы химическая завивка дольше держалась, нужно соблюдать определенный уход за локонами. С основными правилами по уходу за локонами ознакомьтесь далее.

Технология

Само название процедуры означает, что в составе для завивки присутствуют необходимые для здоровья волос натуральные ингредиенты – питательные вещества, витамины, экстракты лекарственных растений, минералы. Но их действие играет вспомогательную роль в технологическом процессе.

Инновационная суть биозавивки состоит в том, что агрессивные вещества, используемые для традиционного перманента, заменены на компоненты, родственные по структуре натуральным элементам, входящим в состав волоса.

Биозавивка волос – фото до и после

В обычном состоянии каждый волос имеет плотно прилегающие друг к другу защитные чешуйки. Связь между ними обеспечивает так называемый сульфидный мостик, или s-связь. Кудрявые локоны – результат жёстких связей, за прямые волосы отвечают мягкие связи.

Классическая химическая завивка включает использование составов с высоким щелочным показателем, в результате s-связи рвутся, разрушается слой кератина, а чешуйки становятся рыхлыми, податливыми. Только можно создавать новые, теперь уже жёсткие, сульфидные мостики и формировать завитки. Хотя задача процедуры выполнена, вьющиеся волосы, лишённые кератина, имеют пористую структуру, выглядят тусклыми и безжизненными.

Биозавивка на средние волосы

Чтобы избежать последствий химического перманента, из технологического процесса биозавивки исключены такие стрессоры, как аммиак или тиогликоль. Их роль отведена теперь цистеамина хлоргидрату. Это синтетическое вещество близко к природному цистину – белку, играющему самую важную роль в соединении внутренних волокон волоса дисульфидными связями.

Такое сходство и обеспечивает безвредность биозавивки, которая изменяет текстуру прядей путём органической реконструкции: волосы не разрушаются, а наполняются белком, становятся пластичными, упругими, блестящими, объёмными.

Описание процедуры

По-настоящему качественный результат биозавивки получается в условиях салона, где процедуру проводит мастер.

Кроме всех предусмотренных технологией этапов обязательна подготовительная стадия.

Проведите тест на возможную нежелательную реакцию: биозавивка противопоказана, если через 15 минут после нанесения активного компонента состава на внутренний сгиб локтя наблюдаются покраснение, гиперемия, зуд кожи.

Следует сообщить стилисту о приёме гормоносодержащих препаратов или антибиотиков: на результат процедуры могут повлиять некоторые лекарственные средства, изменение гормонального фона. Затем мастер оценивает состояние, фактуру волос и с учётом этого подбирает наиболее подходящий тип завитков и необходимую комбинацию средств. Заканчивается подготовительный этап мытьём головы шампунем, очищающим от загрязнений, открывающим кутикулу для лучшего проникновения состава вглубь волоса. Нуждаются в такой процедуре слабые, хрупкие пряди.

Биозавивка на длинных локонах

Теперь можно переходить к самому процессу биозавивки. Стандартная процедура разделена на чётко разграниченные этапы, и для разрушения s-мостиков внутри волоса, и для создания новых связей необходимо выдерживать строго лимитированные промежутки времени. Общее время, которое придётся затратить на биозавивку- около 2 часов.

• 1 этап. Подсушенные после предварительного мытья волосы равномерно накручивают на коклюшки выбранного размера и обрабатывают составом, содержащим цистеамина хлоргидрат. Цистеамин, проникая в кортекс, выполняет функцию транспортёра белка.
• 2 этап. Задача этой стадии процедуры – сгущение доставленного вглубь волоса белка и восстановление серных связей. Для этого используют нейтрализатор, активным компонентом которого выступает бромид натрия. В отличие от составов, применяемых при традиционной химической завивке, нейтрализаторы не содержат перекиси водорода, поэтому не обесцвечивают и не пересушивают волосы.
• 3 этап. На завершающей стадии снимают коклюшки и наносят фиксирующий состав, который иногда называют постзавивочным эквалайзером. Его функции – пригладить и запечатать разрыхлённую кутикулу, дополнительно усилить прочность вновь образованных связей в кортексе, восстановить комфортный для прядей кислотно-щелочной баланс, увлажнить и подпитать волосы изнутри.

Длительность эффекта и периодичность процедуры

На стойкость результата завивки влияет целая совокупность факторов:

• Тип, состояние и длина волос;
• Выбранная методика и свойства состава;
• Квалификация мастера;
• Соблюдение технологии процесса;
• Диаметр и форма завитка (чем мельче локоны, тем дольше они сохраняются).

Опытный мастер обычно прогнозирует длительность эффекта.

Обобщённо можно говорить о том, что в результате грамотно проведённой процедуры великолепные кудри будут радовать их обладательницу не меньше трёх и не дольше шести месяцев.

Повторить биозавивку можно сразу после того, как волосы распрямятся до изначального, естественного состояния, но делать это следует не более 2-трёх раз в год. Правильный уход за локонами после биозавивки поможет пролонгировать её эффект.

Рекомендации по уходу

Уход за волосами после процедуры имеет особенности.

• Чтобы помочь волосам восстановиться после стресса и зафиксировать результат, первое мытьё головы после завивки должно быть не раньше, чем через двое суток. В течение этого же времени не рекомендован любой термостайлинг причёски, укладка феном. В дальнейшем применение горячей укладки и сушки желательно свести к минимуму с обязательным использованием защитных составов.
• К бьюти-средствам для волос предъявляются требования. Отличный вариант, когда все продукты принадлежат одному бренду и предназначены для волнистых прядей, не содержат SLS (SLES), в составе их присутствуют пантенол и кератин, маски для волос имеют питающий и увлажняющий эффект. Более точные персональные рекомендации даёт проводивший завивку мастер, исходя из типа, состояния, фактуры волос.
• Механическое воздействие на завитые пряди должно быть щадящим: после мытья волосы нужно не растирать полотенцем, а осторожно промокнуть и дать им высохнуть естественным путём, массажные щётки и металлические расчёски с частыми, острыми зубцами лучше заменить на редкие гребни из натуральной древесины.
• Любой вид окрашивания или колорирования на волосах, прошедших биозавивку, выполняют через 3-4 недели после процедуры.
• Завитые волосы будут иметь естественный вид, если для укладки использовать средства с консистенцией геля или мусса и минимальной степенью фиксации.

Правильный уход поможет как можно дольше сохранить потрясающий результат биозавивки – наполненные восхитительным сиянием красивые и здоровые волосы.

Видео на  тему

hairs-club.ru

Лучшие средства и препараты для биозавивки волос

Оглавление:

Биозавивка — метод создания локонов, который не вредит волосам. Для такой завивки применяют щадящие составы, которые деликатно воздействуют на локоны, не нарушая защитный слой чешуек. Какие средства и препараты для биозавивки волос лучше использовать? В статье представлен обзор лучших составов, которые не только позволяют формировать упругие завитки, но также улучшают состояние и внешний вид локонов.

Биозавивка волос — лучшие средства

Биозавивка пользуется огромной популярностью среди девушек, которых природа не наградила пышными объемными кудрями. Эта процедура заключается в применении щадящих составов. Такие препараты не содержат аммиак, перекись водорода и другие агрессивные компоненты. За счет этого обеспечивается деликатное воздействие на шевелюру. Препараты для биозавивки волос обогащены полезными компонентами:

• витаминные комплексы;
• кератин;
• протеины шелка;
• аминокислоты;
• протеины пшеницы;
• растительные экстракты.

За счет наличия этих компонентов удается не только формировать завитки на длительное время, но и восстановить поврежденные участки волос, сделать их более крепкими и здоровыми, вернуть природный блеск.

Twisty от RICA

Это современное популярное средство для мягкой щадящей завивки. Уникальный состав, обогащенный протеинами натурального шелка, после нанесения на накрученные пряди наполняет структуру волос и восстанавливает ее. Препарат содержит природные аминокислоты и различные растительные экстракты (бамбука, пшеницы).

В результате после такой завивки шевелюра выглядит намного лучше: появляется привлекательный блеск, волосы выглядят ухоженными и здоровыми. В таком средстве нет аммиака, тиогликолевой кислоты и других агрессивных компонентов. После его использования вам не придется беспокоиться о возможном повреждении шевелюры, так как состав абсолютно безопасен для волос и воздействует мягко, бережно меняя структуру.

ISO Option

Это одно из самых продаваемых средств для биозавивки. Оно пользуется спросом среди парикмахеров в разных странах мира. Основной действующий компонент таких составов — ISOамин. В отличие от других аналогичных препаратов, это действующее вещество проникает глубоко внутрь волоса. Но при этом кутикула не приподымается. Соответственно, отсутствует риск повреждения волос.

Данный препарат обеспечивает эффект текстурирования. В составе нет утяжеляющих увлажняющих добавок. За счет воздействия на клеточном уровне обеспечивается восстановление поврежденных участков волос. Такое средство позволяет формировать легкие кудряшки, улучшая при этом состояние и внешний вид шевелюры.

Ключевой особенностью этих препаратов является эффект восстановления и укрепления водородных соединений внутри волоса.

Mossa

Этот препарат производит компания Green Light. Биозавивка, для которой применяют это средство, называется итальянской. С помощью Мосса удается формировать красивые локоны, которые выглядят так, словно волосы вьются от природы.

Отличительной особенностью этих составов является способность сохранять исходный цвет шевелюры. Также состав Мосса обеспечивает эффект кондиционирования. В продаже доступно несколько разновидностей таких составов, предназначенных для окрашенных, седых, неокрашенных и ослабленных волос.

Evolution от Goldwell

Более 16 лет назад этот продукт впервые появился на рынке как инновационное средство для завивки, которое не вредит волосам. В основе состава липидный комплекс, который оказывает оздоровительный эффект. Состав Goldwell Evolution можно использовать даже для ослабленных и поврежденных прядей после обесцвечивания или других истощающих парикмахерских процедур. Производитель разработал специальную формулу для окрашенных прядей. При использовании такого препарата после завивки сохраняется исходный цвет локонов. Завитки держатся до полугода (в зависимости от структуры волос).

Estel Niagara

Этот био-перманент не содержит аммиак и тиогликолевую кислоту. В основе цистеамин. Это вещество схоже с волосяным белком. Оно мягко воздействует на пряди, восстанавливая поврежденные участки. В результате формируются аккуратные кудряшки. Прическа выглядит ухоженной, кудри смотрятся натурально. В составе присутствует витамин B5 и другие полезные компоненты, которые благоприятно влияют на состояние волос и возвращают им утраченное здоровье.

Запах у Estel Niagara нейтральный, что является еще одним плюсом. В продаже доступны такие средства для биозавивки волос, предназначенные для трудно поддающихся завивке, окрашенных, обесцвеченных и натуральных прядей.

Единственное, что стоит учесть при выборе этого средства — оно подходит только для профессионального применения.

Hahonico SPA’T Seven

Препарат японского производителя на нейтральной основе. В составе присутствует цистиамин, аргинин и тиоглицерин. Щадящее воздействие этих компонентов позволяет применять SPA’T Seven даже для обесцвеченных истощенных прядей. Оказывает увлажняющее воздействие, придает локонам привлекательный блеск.

Schwarzkopf Natural Styling Glamour Wave

Этот лосьон содержит экстракт алоэ вера, протеины натурального шелка и протеины пшеницы. Уникальный комплекс полезных веществ оказывает бережное воздействие на шевелюру. При использовании такого препарата удается объединить сразу две процедуры — завивку и уход.

Увлажняющая система Hydrowave способствует удержанию естественной влаги в волосах. После такой завивки локоны становятся гладкими и шелковистыми. Применять средство надо с нейтрализатором Natural Styling Neutraliser, чтобы достичь лучшего эффекта.

Paul Mitchell Alkaline Wave Perm

Если у вас жесткие волосы, это средство станет лучшим выбором для создания кудряшек. С его помощью удается сформировать упругие завитки сильной фиксации. При его использовании можно делать окрашивание сразу после завивки. В процессе выдерживания состава не требуется применять дополнительные источники тепла.

Активное действующее вещество — цистиамин. В составе нет аммиака. За счет наличия экстракта прополиса обеспечивается мягкое бережное воздействие и предотвращается риск возникновения раздражений на коже головы.

CHI Ionic Shine Waves

Этот состав для биозавивки волос содержит протеины натурального шелка. Он деликатно воздействует на волосы. Такой комплекс подходит как для нормальных, так и для ослабленных прядей. В препарате нет аммиака, тиогликолевой кислоты и других агрессивных компонентов. Однако стоит учитывать, что окрашивать пряди можно только спустя 2-3 недели после применения CHI Ionic Shine Waves. Благодаря отсутствию токсичных веществ этот комплекс можно использовать даже при беременности и в период кормления грудью.

В любом случае, прежде чем купить средства для биозавивки волос, стоит проконсультироваться с парикмахером. Только опытный мастер сможет подобрать для вас оптимальный состав с учетом особенностей структуры и состояния волос.

Набор для биозавивки волос

У каждого мастера в салоне, который предоставляет такую услугу, как биозавивка, есть специальные наборы для выполнения этой процедуры. Для создания завитков с применением щадящих препаратов понадобятся:

• завивочный состав, нейтрализатор и кондиционер;
• коклюшки или бигуди для биозавивки волос;
• расческа;
• губки для нанесения состава;
• перчатки для защиты кожи рук;
• емкость для приготовления средства;
• шапочка;
• полотенце или накидка.

Чаще всего для такой завивки применяют классические деревянные коклюшки. Но также можно использовать бигуди разных диаметров. Некоторые мастера делают завивку на «бумеранги». Для создания спиральных вертикальных завитков в продаже есть специальные вертикальные бигуди. Если вы планируете делать карвинг, вам понадобятся бигуди-карверы. С их помощью удается создавать эффект «ломанных» кудрей.

Волосы после биозавивки — как укладывать и ухаживать

Биозавивка волос или карвинг — что лучше?

Сколько держится биозавивка волос

Биозавивка волос в домашних условиях

areado.ru

кому подойдет, сколько держится, как ухаживать

Кудри и локоны всегда были и будут актуальны среди модниц. А помочь реализовать это может биозавивка. Биозавивка — это щадящая завивка волос, позволяющая надолго сохранить кудри и объем. Метод разработан группой специалистов в 1999 году.

В составе раствора, применяемого при биозавивке, отсутствуют вредоносные волосам и коже головы вещества, не содержится сильный токсин — тиогликолевую кислоту, аммиак и пероксид водорода как при химической завивке. Основное действующее вещество при биозавивке — это биологический белок цистеин, который входит в состав человеческого волоса, укрепляет и питает структуру волос. После процедуры волосы выглядят естественно и красиво. Локоны остаются крепкими, упругими и мягкими, сохраняется их цвет и блеск.

Кому подойдет биозавивка?

Биозавивка подходит для различных типов волос. И так специалистами было установлено 3 основные категории:

1. для натуральных волос
2. для прочных, неподдающихся завивке волос
3. для окрашенных волос и волос, подвергавшихся химической обработке

Процесс биозавивки состоит из нескольких этапов, где волосы подвергаются специальной обработке. Вначале волосы обрабатывают цистеином, далее белок густеет и на конечном этапе используется эквалайзер, предусмотренный для защиты волос. С помощью биозавивки можно выбрать для себя различные формы кудряшек: от мелких кудрей до упругих локонов.

Сколько держится биозавивка?

Биозавивка может продержаться от 3 до 6 месяцев в зависимости от частоты мытья волос, используемых при мытье шампуней. Нужно не забывать, что это зависит также от структуры, длины, толщины и поврежденности волос.

Процедуру биозавивки можно повторять один раз в полгода. После того как ваши волосы прошли испытание биозавивки они нуждаются в особом уходе и профилактике сечении волос. Это вполне можно осуществить в парикмахерских салонах, а также дома. К волосам нужно относиться бережно не пересушивать, осторожно расчесывать.

Как ухаживать за волосами после биозавивки?

Если раньше Вы использовали обычный шампунь для мытья волос, то после биозавивки нужно применять специальные шампуни для вьющихся и кудрявых волос, подпитывать волосы масками, после мытья использовать бальзамы – ополаскиватели, которые позволяют сохранить вьющуюся форму локонов. Сушить волосы нужно специальным феном с диффузором. В домашних условиях нужно применять масляные компрессы. Таким образом, современная биозавивка — это простой и главное, невредный способ обретения очаровательных кудрей и локонов.

beauty-body-studio.ru

Сколько держится биозавивка волос | На сколько хватает по времени

Оглавление:

Самый безопасный для волос способ создания эффектных объемных локонов на длительное время — биозавивка. Для такой процедуры применяют щадящие составы, которые обеспечивают длительный эффект, не повреждая структуру волос. Узнайте, сколько держится биозавивка волос и как правильно ухаживать за шевелюрой после такой процедуры, чтобы продлить эффект.

Биозавивка волос — что это?

Биозавивка представляет собой щадящий метод создания кудряшек на длительное время. Такая завивка отличается от кислотной или щелочной применяемым составом. Для биозавивки используют средства, в составе которых нет аммиака и других агрессивных компонентов. Они деликатно воздействуют на шевелюру, не повреждая внутреннюю структуру волоса. Многие из таких препаратов содержат комплексы витаминов, кератин, протеины шелка, протеины пшеницы и другие растительные экстракты. Такие компоненты питают волосы и насыщают их недостающими элементами. Также богатый полезными веществами состав обеспечивает восстановление поврежденных участков шевелюры. Благодаря этому удается не только сформировать завитки на длительное время, но и оздоровить локоны.

От чего зависит продолжительность эффекта?

Один из ключевых вопросов, возникающих у девушек, которые решились на такую процедуру, как биозавивка волос — сколько держится по времени? Длительность эффекта зависит от таких факторов:

• структуры волос и ее особенностей;
• густоты;
• толщины;
• длины прядей;
• частоты использования фена и других приборов для укладки;
• используемого состава;
• соблюдения правил по уходу за шевелюрой после завивки.

В зависимости от всех этих факторов продолжительность эффекта составляет в среднем от 3 месяцев до полугода. Однако в некоторых случаях завитки выпрямляются быстрее или медленнее. Если волосы хорошо поддаются воздействию используемого препарата, локоны будут сохранять форму в течение 6-9 месяцев.

Ответ на вопрос, сколько держится биозавивка волос, во многом зависит от длины прядей. На коротких стрижках завитки сохраняются дольше всего. На прядях средней длины кудряшки тоже сохраняются долго. На длинных волосах щадящая завивка продержится меньше всего. Это объясняется тем, что из-за большого веса прядей завитки быстро выпрямляются (обычно в течение 4-8 недель).

Как долго держится биозавивка волос в зависимости от используемого препарата?

Есть несколько разновидностей такой завивки. Для каждой из них применяются различные составы. От используемого препарата во многом зависит стойкость результата. Выделяют следующие виды биозавивки:

• карвинг;
• японская биохимия;
• итальянская;
• шелковая волна.

Карвинг — очень популярная методика создания локонов, которая заключается в применении особо щадящих составов. Такие препараты не содержат химические агрессивные компоненты. Они деликатно воздействуют на волосы, не причиняя им никакого вреда. В результате удается создать легкую волну или не слишком четко выраженные кудряшки, которые выглядят естественно. В среднем после применения таких составов завитки не утрачивают форму первые 6-8 недель.

Для японской завивки используют препараты, в основе которых содержатся липидные комплексы и коллаген. Такие составы оказывают благоприятное воздействие на структуру волос, предотвращая их истончение и делая локоны крепче. Такая завивка подойдет даже для ослабленных волос. Но стоит учитывать, что из-за специфики применяемых препаратов японская технология создания кудрей подходит для коротких стрижек и волос длинной чуть ниже плеч. Для более длинных прядей стоит рассмотреть другие разновидности биохимии. Японская технология дает возможность создавать локоны средней фиксации. Насколько хватает такой процедуры, как японская биозавивка волос? На коротких и средних прядях завитки держатся 3-4 месяца. Если состав правильно подобран в соответствии с особенностями структуры волос, можно рассчитывать на эффект до полугода. На длинных прядях кудри продержатся не более 1.5-2 месяцев.

Итальянская биозавивка выполняется с применением препарата Mossa. Эти препараты содержат увлажняющие компоненты, а также питательные вещества, которые насыщают волосы недостающими элементами. В результате удается сформировать локоны сильной фиксации. Поэтому такая завивка подходит даже для обладательниц длинных кос. Эту разновидность биозавивки можно выбирать для ослабленных и истонченных волос. Локоны сохраняют свою форму в течение 2-х и более месяцев в зависимости от особенностей структуры волос. Лучшая фиксация обеспечивается на густых волосах. В таком случае длительность эффекта будет существенно больше.

Шелковая волна — такое название получила процедура завивки, при которой используют щадящие составы на основе протеинов натурального шелка. С помощью этих средств удается создавать локоны слабой фиксации. Главное преимущество этой завивки заключается в том, что особый состав восстанавливает поврежденные участки волос, улучшая их состояние и внешний вид. В результате образуются эффектные локоны, прическа обретает дополнительный объем и привлекательный блеск. Единственный минус заключается в непродолжительном эффекте. Кудри держатся в среднем 4-6 недель.

Когда делать завивку не стоит?

Узнав, сколько держится биозавивка, стоит также узнать, в каких случаях следует перенести эту процедуру на другое время. К таковым относятся:

• период кормления грудью;
• беременность;
• прием гормональных препаратов или других сильнодействующих лекарственных средств;
• обострение заболевания;
• гормональные нарушения.

Завивка в любой из этих периодов может дать непредсказуемый результат. Кроме того, рассчитывать на длительный эффект в таком случае не придется. Лучше отложите процедуру на более подходящее время, а пока займитесь подготовкой волос (делайте маски для укрепления, восстановления прядей). Такие восстанавливающие процедуры позволят значительно продлить эффект после завивки.

Кудри дольше всего держатся на здоровых крепких и густых волосах.

Как ухаживать за локонами?

Чтобы кудряшки сохраняли форму как можно дольше, важно обеспечить правильный уход за шевелюрой. После завивки не мойте голову в течение первых трех дней. На протяжении этого времени происходит фиксация завитков. Также соблюдайте ряд простых правил:

• Старайтесь чаще ходить с распущенными волосами, поскольку тугие прически способствуют деформации и быстрому выпрямлению завитков.
• Не пользуйтесь феном. При необходимости используйте диффузор.
• Не расчесывайте влажные локоны.
• Используйте расческу с редкими зубьями.
• Регулярно делайте питательные маски.
• Защищайте шевелюру от воздействия ультрафиолета. Используйте спреи с УФ-защитой.
• Мойте голову по мере загрязнения (1 раз в три дня).
• Используйте специализированные шампуни, бальзамы и прочие средства для волос после завивки.

Соблюдение этих простых правил позволит не только продлить эффект после завивки, но также улучшить состояние и внешний вид прически.

Волосы после биозавивки — как укладывать и ухаживать

Средства и препараты для биозавивки волос

Биозавивка волос крупными локонами

Биозавивка волос в домашних условиях

areado.ru

особенности, виды и техники, противопоказания. Биозавивка на короткие, средние и длинные волосы.

Плюсы и преимущества

Биозавивка волос — в наши дни это наиболее простой и безопасный способ резко изменить образ, придав ему определенный шарм и романтизм. Девушки — самые страстные любительницы постоянных перемен во внешности. Неудивительно, что индустрия красоты всегда трудилась над усовершенствованием средств, позволяющих сделать прямые волосы кудрявыми, и наоборот. Сегодня смоделировать красивые естественные локоны можно без вреда для структуры волос, как при химической завивке во времена наших бабушек и мам. Как раз с помощью недорогой и относительно безопасной процедуры — биозавивки волос.

Главное отличие биозавивки от химической — отсутствие в составе средств для фиксации завитков аммиака и тиогликолевой кислоты. Таким образом процедура не травмирует сам волос, не повреждает его структуру, а также не наносит вреда коже головы. Главным компонентом биозавивки является вещество, аналогичное аминокислоте, входящей в состав кератина человеческого волоса. Так что такая завивка будет более естественной и щадящей, укрепляющей волос . Кроме того, биозавивка имеет временный эффект, поэтому можно «примерить» новый образ и решить, как долго носить кудри.

Благодаря «не агрессивному» составу средства для биозавивки после процедуры кудри выглядят естественно, сохраняют блеск, гладкость, а самое главное — целостность структуры. Биозавивку можно делать на любую длину волос — и на короткие волосы (наиболее эффектно смотрятся мелкие завитки), и на средние и на длинные волосы (здесь уже можно комбинировать бигуди разного размера, чтобы добиться эффекта максимальной естественности). Кроме того, одинаково успешно можно делать биозавивку как на натуральные, так и на окрашенные волосы. Более того, если у вас тонкие волосы, которым не хватает объема, то после биозавивки никто вам не откажет в комплименте по поводу густой и роскошной прически.

Технология процедуры

Биозавивка волос начинается отнюдь не с выбора бигудей, а с выбора специалиста. От его профессионализма зависит и красота, и здоровье волос. Мастер должен обладать нужными сертификатами, на препарат должна быть лицензия. Перед началом процедуры мастер должен провести диагностику волос, а потом подобрать оптимально подходящий состав. На данный момент существует три типа состава:

• для нормальных волос;
• для ослабленных окрашиванием или мелированием волос;
• для волос, которые трудно поддаются завивке.

Сама процедура биозавивки состоит из нескольких этапов и длится до двух часов. На первом этапе волосы моют специальным очищающим шампунем, затем влажные волосы накручивают на бигуди и обрабатывают специальным раствором. Во время второго этапа на волосы наносят вещество, которое заполняет структуру волоса и фиксирует полученные завитки. В завершение процедуры наносится состав, восстанавливающий кислотно-щелочной баланс волоса .

Для биозавивки волос используют бигуди разного диаметра, все зависит от того, насколько крутой завиток вы хотите получить. Стоит помнить, что размер завитка должен подходить типу волос и овалу лица. Так, например, чем крупнее черты лица, тем крупнее должны быть кудри. Так же возможна комбинация из бигудей разного размера, что позволяет добиться эффекта кудрявых волос от природы.

Виды биозавивки волос: с экстрактом бамбука, коллагеном и шелком

Самые популярные на сегодняшний день виды биозавивки волос — это так называемая «японская» процедура, завивка MOSSA, и нежная на слух «Шелковая волна».

www.woman.ru

Ответы на самые распространенные вопросы по биозавивке волос

Как выбрать бренд для биозавивки?

Совместно с мастером. На нашем сайте мы пишем о лучших марках, выпускающих средства для завивки, но это скорее информационная составляющая, нежели каталог продукции. На обязательной предварительной консультации специалист посоветует вам наилучший для ваших волос и здоровья вариант. 

Сколько держится биозавивка на волосах?

В описании брендов биозавивки обычно указывается срок до 9 месяцев, но данный показатель очень индивидуален: завивка может распрямиться через неделю, если сделать ее без учета противопоказаний, или сохраняться в виде естественных волн до одного года. Помните, что однажды измененная структура волоса без дополнительных манипуляций (например, кератинового выпрямления волос) не сможет полностью вернуться к прежнему виду самостоятельно. Это не значит, что ваши кудри будут жить до момента кардинальной стрижки, внешне они могут стать прямыми. 

Сколько длится сеанс биозавивки волос?

Все зависит от показателей шевелюры: длины, толщины и жесткости волоса, густоты и здоровья. Локальная завивка займет минимум 30 минут, но чаще всего процедура длится от двух до трех с половиной часов.

Что нельзя делать перед биозавивкой волос?

•Обесцвечивать, подвергать различным деформациям, содержать в стрессовых условиях шевелюру. На нездоровую прическу профессионал не станет делать биозавивку ни при каком раскладе.

•Красить волосы – необходим значительный промежуток между этими процедурами, иначе вы столкнетесь с искажением оттенка. 

•Использовать природные пигменты: хну и басму. К сожалению, они не совместимы с манипуляциями по созданию долгоиграющих завитков.

•Выпрямлять локоны кератином – он не позволит составу биозавивки изменить структуру волос.

•Лечить и ухаживать за прической препаратами с содержанием силикона. Кудряшки не «возьмутся».

•Скрывать от мастера состояние своего здоровья, историю преображения своих волос и другие факты, выявляющие противопоказания к завивке. 

Как подготовиться к биозавивке?

•Прежде всего, пройти очную консультацию и достигнуть с мастером взаимного понимания и доверия. 

•Исключить использование средств, влияющих на проницаемость волоса, а также, при необходимости, пройти рекомендуемые процедуры по оздоровлению локонов. 

•Настроиться на успешный результат и в хорошем расположении духа прибыть в салон красоты – от вашего настроя зависит 50% успеха любой салонной процедуры.

Почему мастер может отложить биозавивку на некоторое время?

Подробно мы описали все причины в материале «Противопоказания к биозавивке». Без паники, профессионал принимает подобное решение во благо вам и вашему здоровью.

Биозавивка и покраска волос – можно ли делать их в один день?

Не советуем. Даже если состав завивки позволяет такое совмещение в своей аннотации. Лучшим решением станет окрашивание кудряшек через две-три недели после процедуры. Тогда и цвет, и упругий завиток будут именно такими, как вы хотите.

Прикорневой объем при завивке – как его добиться?

•Прикорневая завивка. Она затрагивает только корни, создавая необходимый объем и пышность прически.

•Следование советам профессионалов. Создание многоуровневой стрижки перед завивкой и применение градуировки, помогающих преодолеть естественную гравитацию и исключить распрямление завитков на длинных и средних волосах.

Почему шевелюры, окрашенные хной или басмой, не стоит завивать?

Ответ можно увидеть только под микроскопом: натуральный пигмент настолько сильно забивает волос, что для компонентов биозавивки просто не остается свободного места. Хна и басма овладевают структурой локонов надолго, поэтому долговременные завитки рискуют «не взяться» даже через полгода после такой покраски.

Обязательно ли подрезать кончики волос перед биозавивкой?

Мы очень рекомендуем послушать своего мастера и провести эту обновляющую прическу процедуру перед завиванием локонов. 

Во-первых, вы оздоровите свои волосы, убрав самые слабые их части, а прибегнув к стрижке горячими ножницами, вы существенно сократите потерю жизненно важных компонентов через свежий срез.

Во-вторых, завивка отлично смотрится на сложных стрижках, проведенных с применением таких специальных техник как градуировка. Ваш новый образ только выиграет от такого незначительного вмешательства.

Какая биозавивка подойдет для обесцвеченных волос?

Самая щадящая, с лечебными компонентами и восстанавливающим действием. Такими качествами в той или иной мере могут похвастаться бренды LANZA, MOSSA, CHI IONIC, Davines, Niagara и ISO Texture.

Вернет ли биозавивка здоровье и блеск волосам?

Как мы уже упоминали выше, здоровой шевелюре отлично проведенная биозавивка добавит блеска и гладкости, напитает прическу и устранит мелкие, невидимые глазу недостатки. Однако не стоит ждать волшебства, если ваши волосы находятся в плачевном состоянии. Такую шевелюру нужно лечить, а не подвергать новым трансформациям.

Будут ли выпадать волосы после биозавивки?

Обильное выпадение волос, свойственное пережженной химке, при профессиональном проведении завивки с применением биосредств, исключается. Однако если у вас и до процедуры была такая проблема, то сеанс создания завитков ее не устранит, а в некоторых случаях может несколько усилить. Расскажите о своих проблемах, опасениях и ожиданиях своему мастеру на консультации, воочию ему будет проще предсказать, ждет ли вас такая неприятность.

Как ухаживать и питать волосы после биозавивки?

Уход за шевелюрой подбирается индивидуально, и давать усредненные советы мы не станем. Это сфера деятельности специалиста, работающего с вашей шевелюрой. Вкратце, исходя из богатого опыта, можем отметить эффективность салонных процедур и профессиональной косметики. А вот бабушкины рецепты и маски из супермаркетов – это настоящая лотерея для завитых локонов.

Как часто можно делать биозавивку?

Мы работаем с лучшими брендами, дающими долговременный эффект, поэтому периодичность завивки два раза в год при должном уходе можно назвать оптимальной и безопасной. Повторная завивка не исключает предварительную консультацию, поэтому каждый раз мастер определяет состояние волос и дает советы относительно оптимального состава и готовности шевелюры к новому преображению.

Какая биозавивка возьмется на толстых и тяжелых волосах?

Для такого типа локонов разработаны специальные составы: Alkaline wave, Exothermic wave, также подойдут универсальные Twisty, Niagara и ISO texture.

Какую биозавивку посоветуете сделать во время лактации?

Настоятельно рекомендуем отложить эту идею до момента, когда кормление грудью будет прекращено. 

Во-первых, ваш гормональный фон еще не пришел в норму, и из-за этого завитки могут быстро раскрутиться. Ни о каких шести-девяти месяцах речь точно не пойдет, вероятность раскручивания кудряшек через пару недель после процедуры весьма высока.

Во-вторых, все, что вы потребляете внутрь и наносите на себя снаружи, может оказывать влияние на вашего малыша, проникая в кровоток и молоко. Зачем вам такой риск? 

Карвинг – это биозавивка?

И да, и нет. Карвинг держится меньшее время, завитки при нем — волнообразные, а не тугие, как при завивке. Это просто долговременная укладка, облегчающая жизнь своей обладательнице. Настоящие кудри держатся в три раза дольше, стоят, соответственно, дороже. Однако учитывая сегодняшнее разнообразие техник и подходов, иногда сложно провести черту между карвингом и волнообразной биозавивкой.

Сколько стоит биозавивка?

Стоимость данной процедуры складывается из нескольких составляющих:

•Цена брендового состава

•Качество шевелюры: длина и густота

•Выбранная техника – форма и локация завитушек

•Квалификация мастера

Соответственно, цена имеет очень широкий  диапазон. Одно можно сказать уверенно: биозавивка не может стоить как химка, не покупайтесь на рекламу, обещающую вам качественную услугу по низкой стоимости, и доверяйте свои волосы только профессионалам с хорошими отзывами.

Как укладывать волосы после биозавивки?

Очень просто! Самый простой вариант – влажные локоны аккуратно разделить при помощи пальцев, нанести стайлинговое средство и высушить естественным образом. Для эффекта мокрых волос необходимо использовать соответствующие гели и муссы.

Можно накручивать локоны на самые разные бигуди за исключением термических. Тогда вы сможете менять образ ежедневно. 

Можно делать укладку при помощи диффузора или посещать салон красоты. В любом случае стайлинг завитых волос – это быстро и просто.

Можно ли временно выпрямлять завитые волосы утюжком или феном с расческой?

Термическое воздействие на волосы сократит жизнь кудряшек и может повредить прическу. За одноразовым выпрямлением рекомендуем идти в салон красоты, где с помощью профессиональной техники и средств вам смогут создать желанный образ.

Как избавиться от неудачной завивки?

Процедура кератинового выпрямления волос станет лучшим выбором в данной ситуации. 

Какой шампунь и средства для укладки подобрать после биозавивки?

Рекомендуем не экономить на этом пункте и приобрести качественные профессиональные средства для кудрявых и завитых волос. Совет мастера будет бесценным в данном вопросе.

Как будет «сходить» биозавивка?

Кудряшки будут отрастать и выпрямляться постепенно, создавая очень естественный образ на любом этапе. Никаких границ, заломов и других неприятных последствий химки вы не увидите на своей шевелюре после биозавивки.

Есть ли запах после биозавивки?

Некоторый аромат, который сложно назвать неприятным, присутствует во время процедуры. По окончании сеанса волосы очищаются от действующего вещества специальным средством, устраняющим этот запах. 

С какими процедурами можно совмещать биозавивку?

Если речь идет об уходе за волосами, то это:

•Ламинирование

•Кератиновая инфузия

•СПА-программы

Если вы имеете в виду, чем занять себя во время биозавивки, то предварительная договоренность позволит вам привести в порядок ваши руки и ноги, получить сеанс массажа, в котором не требуется горизонтальное положение, и пройти косметологический сеанс преображения.

www.naturel-studio.ru

Противопоказания к биозавивке и химической завивке волос

1. Приём антибиотиков. Данный тип медицинских препаратов надолго задерживается в организме человека. Проходит несколько месяцев, прежде чем их остатки будут полностью выведены. Волосы, к сожалению, тоже подвержены проникновению компонентов антибиотиков. Необходимо подождать три и даже четыре месяца с момента последнего приема препаратов, прежде чем записаться на завивку. За это время организм, как правило, избавляется от остатков антибиотиков полностью, а ваши волосы будут готовы к преображению без риска.

2. Склонность к аллергическим реакциям или индивидуальная непереносимость отдельных компонентов составов для биозавивки (что случается редко, но все же бывает и такое). Чтобы убедиться в отсутствии такого риска, следует попросить мастера выполнить проверку состава на сгибе руки. Такой тест на коже поможет понять все ли в порядке.

3. Если вы принимаете сильнодействующие лекарственные препараты, а гормональные не являются исключением, волосы во время процедуры могут вести себя непредсказуемо. Гормональный сбой во время подготовки к беременности тоже фактор риска не получить желаемый результат завивки. Дождемся, когда эти процессы пройдут, ну и тогда можно думать о красивых кудрях.

4. Если вы чувствуете, что начинаете заболевать, если у вас повышенная температура или «простудные» заболевания (ОРВИ), стоит отложить визит в салон до выздоровления.

5. Ситуация, когда волос не поддается завивке по непонятным причинам. Вроде бы не выявлено противопоказаний по изученным опытным путем случаям, но ни один состав не «берет» волос, и он категорически «отказывается» завиваться. В таком случае поможет только перебор завивочных комплексов для выявления подходящего. Предупредите мастера, что сталкивались с подобной ситуацией, когда завиток не «берется» или сходит очень быстро. Тест-прядь на отдельных локонах в некоторых случаях поможет выявить возможность выполнить завивку с хорошим результатом. К сожалению, гарантии, что все получится, в этих редких случаях не может дать ни один мастер.

6. Хна или басма. Вот тут ситуация спорная. Шансы, что на окрашенные натуральными красителями волосы завивка «возьмется» и результат будет хорошим, весьма высоки, но гарантированно сказать на этот счет можно только одно «повезет — не повезет». Волосы с хной или басмой ведут себя очень непредсказуемо. Тест-прядь в большинстве случаев позволит определить возможность сделать завивку после такого окрашивания. Если же вы сомневаетесь, то дождитесь, когда отрастут волосы, и не подвергайте их новому окрашиванию этими средствами.

7. Неоднократное обесцвечивание волос или окрашивание агрессивными компонентами. Здесь категорически нужно терпеливо ждать, когда отрастут новые волосы. Это будет лучший вариант. Сами по себе данные процедуры наносят значительный урон вашему волосу, разрушая структуру и ослабляя их, вплоть до потери ощутимого объема шевелюры. В нашем салоне вы, как правило, получите отказ на проведение биозавивки или химической завивки в подобном случае, но в отдельных ситуациях предварительное лечение может благоприятно воздействовать на общее состояние волос, и тогда завивка возможна. Только консультация с мастером позволит выявить такую вероятность.

8. Ранее выполненное выпрямление волос кератиновыми составами. В подобном случае блокируется нормальное поступление компонентов завивки по всему внутреннему «объёму» волоса. Результат может быть локальным (завьются отдельные пряди) или вовсе негативным. Рекомендуем ждать, когда сойдет действие «выпрямляющих» составов и приходить на преображение за роскошными кудрями. То же можно сказать о составах на силиконовой основе. Маски и специальные шампуни с такими компонентами создают блокаду для проникновения содержимого биозавивочного комплекса.

www.kudrihouse.ru

Биозавивка волос: что это такое?

Мнение


17 апреля 2019


Рапупупунцель
Блогер

Попросили автора одного из самых крупных и обстоятельных телеграм-каналов о волосах рассказать нам, как работает химическая завивка и есть ли шанс, что вы сможете завить волосы надолго и не повредить их.

Биозавивка — как много в этом слове для сердец некоторых… Ой, что это я. Первый вопрос, который возникает при знакомстве с этой технологией, — почему «био»? Потому что маркетологи. Чтобы разобраться, давайте копнем издалека. Наши волосы состоят почти полностью из кератина, который состоит из аминокислот, объединенных в полипептидные цепочки, расположенные вдоль волоса. Поперек волоса эти молекулярные цепочки связаны между собой тремя видами связей-мостиков: водородными, ионными и дисульфидными.

Водородные связи легко разрушаются и восстанавливаются под воздействием воды, и затем волосы фиксируются в том положении, в котором высохли.

Благодаря этому мы можем делать классическую укладку на бигуди или выпрямлять волосы на брашинге. Ну или проснуться с гнездом, поспав с мокрой головой. Этих связей в волосах много, они восстанавливаются со временем.

Ионные связи называют еще солевыми. Они тоже являются довольно слабыми связями и разрушаются щелочью и кислотой (считай, шампунями и кислыми кондиционерами). То есть они зависят от pH и восстанавливаются при нормальном pH волос.


Дисульфидные связи самые прочные из этой троицы, но их меньше всех. Они разрушаются при очень высоких температурах или от средств для химзавивки/выпрямления, а также при сложном окрашивании (покрасить волосы оттеночным кондиционером — это не сложное окрашивание). Эти связи сами не восстанавливаются. Чтобы изменить форму волоса, всегда требуется разрушить какие-то связи внутри и восстановить их.

То есть это ВСЕГДА химический процесс.

Даже завивка на бигуди будет химической — рушим водородные связи в мокром волосе и восстанавливаем их сушкой. Но это я уж прям цепляюсь за слова, а если вспомнить о более долгосрочных завивках, то обычно говорят о химической, кислотной и биозавивке, выделяя последнюю как щадящую.

В составах классической химзавивки активным компонентом являются тиогликолят аммония или натрия, они же часто используются и для выпрямления, так как с их помощью волосы «разрыхляются» и могут принять новую форму, которую затем фиксирует специальный состав. В кислотной завивке для той же цели используется глицерилмонотиогликолят, который действует немного мягче, то есть меньше разрушает волосы, но из-за этого и новая форма будет не настолько сильно отличаться от исходной.


В биозавивке используется цистеамина хлоргидрат — вещество, сходное по свойствам с цистеином. Цистеин — это серосодержащая аминокислота, ее очень много в волосах, и именно между цистеинчиками образуются те самые дисульфидные мостики, которые и разрушаются/воссоздаются для создания перманентных завивок и выпрямлений. Где-то отсюда и растут ноги у понятия «биозавивка» — типа завиваем тем же самым веществом, что уже есть у наших волос, то есть будто бы никакого вреда.

Еще есть версия, что приставка «био» появилась из-за того, что цистеамина хлоргидрат вроде как получают из овечьей шерсти. Черт знает, вообще цистеамина хлоргидрат — синтетическое реструктурирующее вещество, которое может замещать цистеин в структуре волоса, и в процессе этого замещения можно зафиксировать волосы в новой форме.

Звучит не так стремно, как «разрушить волосы и слепить их заново», как у классической химзавивки, потому процедуру и считают более бережной. А вот часто встречающееся «почти все компоненты натуральные, потому этот состав такой мягкий» уже очевидно звучит как чушь.

Как вы понимаете, чтобы сделать из прямых волос прям кудри-кудри, нужно их хорошенько поломать, иначе откуда взяться изгибу? Составы биозавивки слишком нежны по отношению к волосам, чтобы сделать тугие локоны, поэтому подойдут не всем.

Любители мелкого беса точно идут мимо, обладатели толстых и жестких волос — тоже.

И при этом процедура все же предполагает внесение изменений в структуру волос, из-за чего ее не стоит проводить на очень поврежденных волосах, как бы красиво ни ворковали об ухаживающих свойствах составов господа маркетологи.

Узнайте больше по тегам:

Рапупупунцель
Блогер

Вам будет интересноВам будет интересноВам будет интересноВам будет интересноВам будет интересно

Купон Luxe-окрашивание волос, spa-уход: купи скидку 50% за 60 руб. Студия красоты Platinum м. Сокольники, условия акции и особенности

Условия акции

Парикмахерские услуги в студии красоты Platinum

Стрижка, spa-уход, укладка

• Коррекция челки с применением лечебных масел. Купон за 60р. и доплата на месте: 70р. вместо 250р. Скидка 50%
• «Голливудские локоны», укладка на брашинг или выпрямление волос утюжком. Купон за 140р. и доплата на месте: 150р. вместо 2000р. Скидка 86%
• Модельная, контурная или лечебная стрижка и сушка. Купон за 320р. и доплата на 330р. вместо 1800р. Скидка 64%
• Ампульная биозавивка «Ангельские локоны», «Крупные локоны» или «Упругие локоны», стрижка (модельная, контурная или лечебная) и сушка. Купон за 370р. и доплата на месте: 380р. вместо 4400р. Скидка 83%
• Spa-уход (горячее обертывание шелком, кератиновое биоламинирование или восстановление «жидкими кристаллами»), стрижка (модельная, контурная или лечебная) и сушка. Купон за 560р. и доплата на месте: 570р. вместо 3250р. Скидка 65%

Luxe-окрашивание волос, spa-уход, стрижка

• Luxe-окрашивание волос (в 1 тон, 3D, колорирование, балаяж, шатуш, омбре, калифорнийское мелирование), стрижка (модельная, контурная или лечебная) и сушка у топ-стилиста. Купон за 490р. и доплата на месте: 500р. вместо 6650р. Скидка 85%
• Spa-уход (горячее обертывание шелком, кератиновое биоламинирование или восстановление «жидкими кристаллами»), luxe-окрашивание (3D, колорирование, балаяж, шатуш, омбре, калифорнийское мелирование, в 1 тон), стрижка (модельная, контурная или лечебная), сушка у топ-стилиста. Купон за 580р. и доплата на месте: 590р. вместо 3250р. Скидка 64%

Восстановление волос, полировка, окрашивание, стрижка

• Spa-уход (горячее обертывание шелком, кератиновое биоламинирование или восстановление «жидкими кристаллами»), лечебная стрижка-полировка Polishen против секущихся кончиков (без укорачивания длины волос) и simple-сушка у топ-стилиста. Купон за 580р. и доплата на месте: 590р. вместо 3250р. Скидка 64%
• Голливудское кератиновое выпрямление Brazilian Blowout, CocoChoco или «Ботокс для волос» Honma Tokyo, стрижка (модельная, контурная или лечебная) и запаивание волос утюжком у топ-стилиста. Купон за 720р. и доплата на месте: 730р. вместо 7200р. Скидка 80%
• Luxe-окрашивание (3D, колорирование, балаяж, шатуш, омбре, калифорнийское мелирование или в один тон), голливудское кератиновое выпрямление Brazilian Blowout, CocoChoco или «Ботокс для волос» для волос Honma Tokyo, стрижка (модельная, контурная или лечебная) и запаивание волос утюжком у топ-стилиста. Купон за 880р. и доплата на месте: 890р. вместо 6550р. Скидка 73%
• Используется профессиональная косметика L’Oreal, Constant Delight, Kapous, Brazilian Blowout, CocoChoco, Honma Tokyo, Lebel, Redken, Matrix, Moroccanoil, Hair Company
• В стоимость окрашивания входит 10 г краски. Доплата за каждые дополнительные 10 г краски — 350р.
• При длине волос более 40 см необходимы доплаты за каждые 10 см длины:
  • окрашивание (работа мастера) — по 250р.
  • spa-уход, «Ботокс для волос» — по 390р.
  • кератиновое выпрямление — по 500р.
• Возможны доплаты за густоту волос и (по желанию) за дополнительные услуги, не включенные в стоимость
• Услуги предоставляет: Индивидуальный предприниматель Слепов Олег Владимирович, ИНН 620301368365, ОГРНИП 317623400004281
• Купон действителен с 26.04.2018 по 26.09.2018

Ампульная сыворотка с витаминами FarmStay DR-V8 Vitamin Ampoule

Многофункциональная ампульная сыворотка с витаминным комплексом Farmstay Dr-V8 Vitamin Ampoule для интенсивного увлажнения, тонизирования и осветления кожи.

Ампульная сыворотка убирает сухость и шелушения, напитывает кожу влагой, выравнивает тон кожи. Она проводит влагу на глубочайшие слои кожи и напитывает эпидермис необходимыми витаминами и антиоксидантами изнутри. Мягко осветляет, улучшает общий тон лица, помогает в борьбе с пигментацией и пост-акне.

Витаминный комплекс содержит:

• Витамин С (аскорбиновая кислота) — оказывает бережное осветляющее действие, является мощным антиоксидантом, устраняет пятна постакне и веснушки, снимает красноту кожи.
• Витамин Е (токоферол) — защищает кожу от негативного воздействия внешних факторов, предупреждает окисление ненасыщенных липидов. Интенсивно насыщает кожу витаминами. Способен проникнуть в глубокие слои кожи, где гидролизуется в витамин Е.
• Витамин В5 (пантотеновая кислота) — используется в лечении кожных заболеваний и для устранения ряда несовершенств кожи: способствует ускорению обменных процессов, активизирует клеточное деление, предупреждает раннее увядание
• Витамин В3 (ниацинамид) — повышает выработку коллагена и барьерные функции кожи, способствует сокращению трансэпидермальной потери влаги, снижает пигментацию, обладает смягчающими и увлажняющими свойствами.

Основные действующие компоненты:

• Экстракт алоэ вера — обеспечивает многоуровневую защиту кожи и глубокое увлажнение. Он создает на поверхности кожи неосязаемую защитную пленку и препятствует испарению влаги, насыщает необходимыми минералами и микроэлементами, повышает иммунитет и защитные функции кожи.
• Экстракт ромашки — хорошо успокаивает кожу, снимает покраснения и раздражение, уменьшает воспаления и препятствует их повторному появлению.
• Экстракт зелёного чая — насыщает кожу витаминами и минералами, увлажняет, тонизирует, контролирует жирность кожи. Улучшает цвет лица и придает коже здоровое сияние.
  Идеально подойдёт для всех типов кожи, в особенности для тусклой и уставшей кожи.

Способ применения: наберите с помощью ложечки немного сыворотки и нанесите на лицо. Равномерно распределите и вотрите в кожу до полного впитывания. Сыворотку можно использовать как самостоятельное средство, так и в сочетании с другими ухаживающими средствами.

Страна бренда: Южная Корея

Тип средства/товара
: Сыворотка,

Омолаживающая ампульная сыворотка с пептидами Medi-Peel Peptide 9 Volume Bio Tox

Омолаживающая ампульная сыворотка с пептидами Medi-Peel Peptide 9 Volume Bio Tox Amoule оказывает направленное антивозрастное воздействие на кожу и препятствует развитию возрастных процессов. Обладает подтягивающим эффектом, уменьшает выраженность морщин и кожных заломов, разглаживает рельеф, возвращает коже гладкость и эластичность.

Сыворотка активно восстанавливает структуру эпидермиса, укрепляет волокна, стимулирует выработку коллагена и эластина и делает кожу более плотной. Оказывает лифтинг-эффект, выравнивает рельеф лица и препятствует провисанию кожи. Глубоко увлажняет и питает клетки, способствует удержанию влаги в глубоких слоях эпидермиса, не допускает обезвоженности и дегидратации, поддерживает упругость кожи.

Средство помогает бороться с нежелательной пигментацией: осветляет пигментные и застойные пятна, препятствует появлению новых, выравнивает тон лица и придает ему естественное мягкое сияние.

Сыворотка обладает легкой сгущенной консистенцией, легко распределяется по коже и быстро впитывается, не оставляя липкости и стянутости.

Основные действующие ингредиенты:


• Ниацинамид увеличивает синтез керамидов, устраняет сухость, стянутость и шелушение. Замедляет доставку меланина к эпидермису, предотвращает образование пигментнх пятен. Снижает чувствительность кожи к внешним раздражителям, способствует производству коллагена и повышению плотности кожи. Уменьшает трансэпидермальную потерю влаги и поддерживает защитный барьер кожи.
• Комплекс 9 пептидов отвечает за постоянную регенерацию и обновление клеток, оказывает глубокое anti-age воздействие, сокращает видимость морщин и препятствует образованию новых, стимулирует процессы обновления и регенерации, замедляет старение клеток. Нормализует выработку коллагена и эластина, разглаживает кожу, выравнивает рельеф. Улучшает цвет кожи, придает ей здоровое сияние и упругость.
• Астаксантин — мощный антиоксидант, который называют главным «антиоксидантом молодости». Астаксантин активен во всех слоях кожи, обеспечивает защиту от УФ-повреждений, уменьшает морщины и осветляет возрастные пятна.
• Комплекс аминокислот стимулирует синтез коллагена, способствует выравниванию рельефа, препятствуют образованию морщин. Поддерживают процессы обновления и регенерации, смягчают и восстанавливают кожу.
• Аденозин активно влияет на производство коллагена,стимулирует производство эластина в клетках эпидермиса,снижает количество морщин, появляющихся с возрастом, уменьшает их глубину.
• Гидролизированный эластин повышает эластичность и гладкость кожи, выравнивает рельеф лица. Связывает влагу в эпидермисе и не дает ей испариться.
• Комплекс гиалуроновой кислоты проникает в глубокие слои эпидермиса, активно увлажняет клетки, способствует удержанию влаги в коже. Образует защитный слой, который не дает влаге испариться.

Подходит для тусклой кожи с признаками старения.

Способ применения: на очищенную и тонизированную кожу нанесите пару капель сыворотки, кончиками пальцев распределите и дождитесь впитывания.

Страна бренда: Южная Корея

Ампульная маска с экстрактом ласточкиного гнезда «Моделирующая» 1 шт

Ампульная маска с экстрактом ласточкиного гнезда «Моделирующая» — двухэтапная процедура. Морская ласточка с помощью своей уникальной слюны способна моделировать тяжелую конструкцию гнезда (вес которого обычно превышает её собственный вес в 10–15 раз), скрепляя им глину, почву и растительные материалы. Экстракт из этого биококтейля беспрецедентен по своему составу и антивозрастному эффекту для кожи. 

1 шаг: Эссенция для моделирования овала лица снижает дефицит влаги, повышает тургор, эластичность кожи лица. Отделите саше с эссенцией по линии отрыва. Нанесите содержимое на очищенную кожу, равномерно распределив по всему лицу.

2 шаг: Маска для моделирования овала лица обладает эффектом разглаживания морщин и предотвращения образования новых. Богатый аминокислотами и пептидами коктейль из экстрактов ласточкиного гнезда, козьего молока и церамидов обладает выраженными ревитализирующими свойствами. Натуральный увлажняющий фактор (NMF) в сочетании с гиалуроновой кислотой помогает восстановить естественный уровень влаги в коже и длительное время поддерживать его баланс. Экстракт портулака обеспечивает комплексу успокаивающий и детокс-эффект. До того, как эссенция впитается, достаньте маску из упаковки и поместите её на лицо. Снимите маску через 15–20 минут и мягко распределите остатки эмульсии по кожным линиям.

Доставка по Москве и МО (до 10км от МКАД) – БЕСПЛАТНО. При сумме заказа от 1000р

Доставка в города Балашиха (мкр Железнодорожный, мкр Ольгино, мкр Кучино), Мытищи, Ногинск, Купавна — БЕСПЛАТНО

Вы можете оплатить свой заказ:

1. Наличными/банковскими картами при получении

2. Банковской картой на сайте (Visa, Visa Electron, MasterCard, Maestro, МИР)

3. Стоимость заказа можно оплатить через системы электронных платежей.

Отзывы о Ампульная маска с экстрактом ласточкиного гнезда «Моделирующая» 1 шт

Написать отзыв

5% Фиксированная скидка для зарегистрированных пользователей

10% При единовременном заказе на сумму от 10 000р

При заказе Ваша скидка распространяется на ВСЕ БРЕНДЫ профессиональной косметики. Во время проведения акций скидки не суммируются. Приятных покупок!

Что такое ампульная косметика и почему она эффективна

Направленное действие, высокая эффективность, долговременное решение возрастных проблем кожи — на все это способна ампульная косметика. Выяснить другие важные подробности о новом жанре средств для ухода за кожей нам помогала Светлана Александровна Зубкова, врач-дерматолог, к.м.н., эксперт лаборатории Faberlic.

Чем отличается ампульная косметика от обычной

Прежде всего ампульная косметика отличается формой выпуска: это сыворотка, помещенная не в привычный флакон с дозатором, а в ампулы. У такого метода упаковки несколько плюсов.

• Такое средство удобно дозировать. Не придется гадать, сколько капель сыворотки надо нанести на кожу и сколько раз надавить на дозатор. Все просто: одна ампула — одно применение.
• У сыворотки в ампулах максимальная концентрация полезных веществ. А в составе — тщательно подобранное сочетание компонентов, направленных на решение одной определенной задачи.
• Ампула — это герметичная упаковка, то есть в составе почти нет, а иногда и вообще нет консервантов. Они не нужны, потому что содержимое ампулы используется сразу после вскрытия и не хранится долго.
• Ампульная сыворотка практически не содержит загустителей, эмульгаторов, эмолентов, часто не содержит отдушек и красителей, что снижает риск возникновения аллергии и усиливает проникновение веществ в кожу.

Почему стоит выбирать ампульные средства

Можно ли сказать, что ампульная косметика более эффективна, чем обычные средства? Да. Потому что в ампулы обычно помещают дорогостоящие компоненты, которые трудно уживаются в сложных составах. Например, в креме липиды основы могут препятствовать поступлению водорастворимых ингредиентов глубоко в кожу, или в открытой банке особо нежные активы могут быстро окисляться на свежем воздухе. Поэтому выход один — поместить их в водный раствор ампулы без консервантов, для одного применения.

Как пользоваться ампульной косметикой

Использование ампульной сыворотки очень напоминает использование средства во флаконе. Выбирать продукт надо в зависимости от проблемы, которую нужно решить. Так же, как и сыворотки, ампульные концентраты нужно использовать курсом, чтобы заметить видимый эффект.

Возраст. Пользоваться ампулами можно в любом возрасте, ведь в первую очередь состав выбирают по типу кожи и в зависимости от проблемы, которую нужно решить.

Время суток. Косметику в ампулах можно использовать как утром, так и вечером, один или два раза в день.

Длительность применения. В использовании любых активных продуктов есть несколько периодов:

• Период воздействия, когда видны изменения кожи.
• Период насыщения и адаптации, когда максимальный ответ кожи достигнут и дальнейших улучшений не наступает.
• Период отдыха.

Ампульная косметика применяется курсом, и его продолжительность можно рассчитать. Один цикл смены клеток рогового слоя кожи происходит за 28—60 дней, и длительность использования ампул обычно кратна этим цифрам. Чем старше женщина, тем дольше используются средства.

Видимый результат. Чтобы кожа «наработала» новые компоненты, ей понадобится время — те же самые 28—60 дней. Эффект от программы можно оценивать приблизительно через этот промежуток времени. После этого можно сделать перерыв. Повторять курс можно через 2—3 месяца.

Правила нанесения содержимого ампулы на кожу

Основное правило нанесения ампульной сыворотки — скорость.

• Нанесите содержимое ампулы на кончики пальцев и быстро распределите. Не медлите. Активные вещества должны впитаться в кожу лица, а не в подушечки пальцев.
• Легкими движениями быстро нанесите состав на лицо по массажным линиям. Помните, что ампульные активы впитываются почти моментально, поэтому медлить нельзя.
• Приложите пальцы к лицу и мягкими надавливающими движениями вбейте то, что еще не впиталось, как бы проталкивая средство в кожу.

Наносить содержимое ампул надо на влажную после тонизации кожу, чтобы усилить увлажняющий эффект и ускорить проникновение активных компонентов. Через 5—10 минут, когда сыворотка полностью впитается, можно наносить крем. Он создает на поверхности защитную пленку, которая препятствует испарению влаги. В увлажненной коже обменные процессы идут активнее, значит полезные компоненты ампулы будут использоваться более эффективно. Также ампульные составы можно использовать перед маской для лица — они отлично работают вместе. 

Часто задаваемые вопросы о BioWave о том, как использовать неопиоидную интеллектуальную технологию обезболивания

Основные вопросы клиентов по использованию BioWaveGO

Моя BioWaveGO включена, и все, что она делает, это пищит и мигает оранжевым светом.

Ответ: Убедитесь, что кабель отведения надежно подключен к BioWaveGO, надежно подключен к подушечкам для снятия боли и что подушечки для снятия боли имеют хорошее прилегание к коже.

Я не могу установить сопряжение между BioWaveGO и моим мобильным телефоном.

Ответ: Убедитесь, что функция Bluetooth включена, затем подключите BioWaveGO к своему телу и сначала включите BioWaveGO. Включите приложение, и вы должны услышать звуковой сигнал, как только ваш телефон будет сопряжен с BioWaveGO.

Болевые подушечки не прилипают к моей коже

Ответ: Важно, чтобы кожа была очищена / подготовлена ​​перед тем, как накладывать обезболивающие на кожу.Энергично протрите кожу сухим или слегка влажным полотенцем, в двух местах поместите обезболивающие. Примечание: * Кожа должна быть сухой и неповрежденной перед тем, как накладывать обезболивающие на кожу

Что такое технология блокировки боли BioWave Smarter?

Что это? Технология
BioWave — это запатентованная более умная технология блокирования боли, которая передает терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани к болевым нервам, блокируя сигнал боли в мозг.BioWave действует как новокаин, за исключением того, что BioWave блокирует болевой сигнал электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли. И есть кумулятивная выгода от нескольких процедур. Если ваш метод обезболивания вам не помогает, вам нечего терять, попробовав BioWave. BioWaveHOME можно приобрести по рецепту, а BioWaveGO можно приобрести без рецепта прямо с нашего веб-сайта www.biowave.com/GO. Оба используются для лечения любого типа хронической или острой боли, и оба имеют 30-дневную гарантию возврата денег. Вы можете связаться с нами здесь, и один из наших специалистов по обслуживанию клиентов ответит на любые ваши вопросы. Вы также можете связаться с нами по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283).

Предоставляется ли на BioWaveGO гарантия?

BioWave с гордостью предлагает 1 год гарантии на BioWaveGO. Если ваше устройство выйдет из строя по какой-либо причине, мы заменим его бесплатно, без хлопот и без ожидания ремонта.Если у вас возникнут вопросы по гарантии или запрос на гарантию, позвоните в службу поддержки клиентов BioWave по телефону 877-246-9283 X 1. Спасибо за доверие к BioWave.

BioWave отличается от TENS?

Краткий ответ — Да, BioWave превосходит TENS. BioWave блокирует болевой сигнал на болевых нервах в глубоких тканях. TENS просто отвлекает поверхность кожи.

Является ли BioWave устройством TENS?

BioWave — это не ДЕСЯТКИ.Низкочастотные сигналы TENS не могут проходить через кожу из-за сопротивления кожи. В результате TENS создает ощущение на поверхности кожи, которое МОЖЕТ отвлекать пациента от боли. Когда сигнал TENS удален, остаточная польза для пациента незначительна.

Технология

BioWave — это запатентованная более умная технология блокирования боли, которая передает терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани к болевым нервам, блокируя сигнал боли в мозг.BioWave действует как новокаин, за исключением того, что BioWave блокирует болевой сигнал электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли. Более подробная информация о том, чем BioWave превосходит TENS, доступна на сайте www.biowave.com/tens-vs-biowave.

BioWaveHOME можно приобрести по рецепту, а BioWaveGO можно приобрести без рецепта прямо с нашего веб-сайта www.biowave.com/GO.Оба используются для лечения любого типа хронической или острой боли, и оба имеют 30-дневную гарантию возврата денег. Вы можете связаться с нами здесь, и один из наших специалистов по обслуживанию клиентов ответит на любые ваши вопросы. Вы также можете связаться с нами по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Является ли BioWave устройством TENS? (ДЛЯ ПАЦИЕНТОВ)

Если устройства TENS вам не помогают, вам нечего терять, попробовав BioWave.Заполните короткую форму здесь, и один из наших специалистов свяжется с вами, чтобы облегчить процесс. Часто вам не нужно платить за устройство или какие-либо дополнительные расходные материалы. Вы также можете связаться с нами по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). BioWave гордится тем, что работает с ведущими медицинскими организациями, которые лидируют в разработке новых неопиоидных болеутоляющих средств для всех типов болевых состояний. Спасибо за Ваш интерес.

Механизмы действия — ДЕСЯТКИ против BioWave (ДЛЯ ВРАЧЕЙ)

Низкочастотные сигналы

TENS не могут проходить через кожу из-за сопротивления кожи.В результате TENS создает ощущение подергивания на поверхности кожи, которое МОЖЕТ отвлекать пациента от боли. Когда сигнал TENS удален, остаточная польза для пациента незначительна. Этот механизм действия известен как теория управления воротами.

BioWave использует технологию суммирования высокочастотных сигналов, которые проходят через кожу непосредственно к ноцицептивным болевым волокнам. Заряд на поверхности волокон боли вызывает умножение высокочастотных сигналов, в результате чего возникает низкочастотное электрическое поле, которое охватывает волокна боли и прерывает распространение потенциала действия по С-волокнам, препятствуя передаче сигналов боли в мозг. .Электрическое поле также вызывает гипестезию на A-дельта-волокнах, создавая легкое онемение вокруг места боли. Этот первичный механизм действия известен как теория блока частотной проводимости. В результате 30-минутное лечение может обеспечить до 24 часов постоянного облегчения боли и функционального улучшения. Поскольку активное электрическое поле BioWave возникает на поверхности нерва, величина и продолжительность обезболивания значительно больше и дольше, чем у TENS.

Более подробная информация доступна на сайте www.biowave.com/what-is-biowave/technology/. Клинические исследования можно загрузить с сайта www.biowave.com/clinical.

В чем разница между BioWavePRO, BioWaveHOME и BioWaveGO

BioWavePRO, BioWaveHOME и BioWaveGO используют запатентованную технологию интеллектуального блокирования боли BioWave, которая работает путем доставки терапевтических электрических сигналов через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли, блокирующих передачу сигналов боли в мозг.BioWavePRO — это более крупное портативное устройство повышенной прочности с гораздо большей системой батарей, предназначенное для использования в течение всего дня в коммерческих условиях, таких как больница, кабинет врача, клиника физиотерапии или спортивный зал. BioWaveHOME — это портативное устройство меньшего размера с меньшим объемом аккумуляторных батарей по рецепту, предназначенное для использования отдельным пациентом дома. BioWaveGO — это небольшой безрецептурный носимый прибор, который можно приобрести без рецепта. Для получения дополнительной информации свяжитесь с нами здесь или по адресу support @ biowave.com или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

BioWave не является опиоидным?

BioWave не является опиоидным. BioWave — это не лекарство, это медицинское устройство, в котором используется запатентованная более умная технология блокирования боли, которая доставляет терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли, блокирующих передачу сигналов боли в мозг. Для получения дополнительной информации свяжитесь с нами здесь или по адресу support @ biowave.com или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Для кого предназначена BioWave?

BioWave предназначен для любого человека, страдающего хронической, острой или послеоперационной болью в большинстве участков тела. Спина, плечо, шея, локоть, запястье, колено, лодыжка — почти везде, где у вас есть боль. BioWave — это запатентованная более умная технология блокирования боли, которая доставляет терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли, блокируя передачу сигналов боли в мозг.Для получения дополнительной информации свяжитесь с нами здесь или по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Что такое BioWaveHOME?

BioWaveHOME — это портативная запатентованная технология, одобренная Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, которая работает путем передачи терапевтических электрических сигналов через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли. Электрическое поле, которое формируется вокруг волокон боли, блокирует передачу сигналов боли в мозг.Технология BioWave работает как химический анестетик, такой как новокаин, за исключением того, что технология BioWave блокирует передачу болевого сигнала электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли. И есть кумулятивная выгода от нескольких процедур.

Что такое BioWaveGO?

BioWaveGO — это портативная запатентованная FDA, одобренная FDA, более умная технология блокирования боли, которая работает путем передачи терапевтических электрических сигналов через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли.Электрическое поле, которое формируется вокруг волокон боли, блокирует передачу сигналов боли в мозг. Технология BioWave работает как химический анестетик, такой как новокаин, за исключением того, что технология BioWave блокирует передачу болевого сигнала электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли. И есть кумулятивная выгода от нескольких процедур.

Работает ли BioWave одинаково хорошо при хронической и острой боли?

Да, BioWave одинаково хорошо справляется как с хронической, так и с острой болью.BioWave — это запатентованная более умная технология блокирования боли, которая передает терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли. Электрическое поле, которое формируется вокруг волокон боли, блокирует передачу сигналов боли в мозг. Технология BioWave работает так же, как химический анестетик, такой как новокаин, за исключением того, что BioWave блокирует передачу болевого сигнала электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли.И есть кумулятивная выгода от нескольких процедур. Если ваш метод обезболивания вам не помогает, вам нечего терять, попробовав BioWave. Заполните короткую форму здесь, и один из наших специалистов свяжется с вами, чтобы облегчить процесс получения устройства BioWaveHOME. Часто вам не нужно платить за устройство или какие-либо дополнительные расходные материалы. BioWaveHOME отпускается по рецепту для пациентов с хронической и острой болью. Вы также можете связаться с нами здесь или по адресу support @ biowave.com или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

BioWave безопасна?

Да, BioWave — это очень безопасное лечение — никаких известных побочных эффектов нет. Кроме того, запатентованная технология сигналов BioWave отслеживает плотность мощности на каждом электроде в режиме реального времени и автоматически предотвращает чрезмерное повышение интенсивности у пациентов, тем самым предотвращая ожог пациента. BioWave — единственный нейростимулятор на рынке, в котором есть встроенная автоматическая технология безопасности, предотвращающая ожоги.

Больно ли BioWave?

Нет, BioWave очень удобен — процедура ощущается как глубокое гладкое ощущение. Пациенты описывают BioWave как ощущение глубокого массажа тканей. Для получения дополнительных вопросов или информации свяжитесь с нами по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Подходит ли BioWave для лечения фибромиалгии?

Да, BioWave лечит боль, вызванную фибромиалгией.BioWave — это запатентованная более умная технология блокирования боли, которая передает терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли. Электрическое поле, которое формируется вокруг волокон боли, блокирует передачу сигналов боли в мозг. Технология BioWave работает так же, как химический анестетик, такой как новокаин, за исключением того, что BioWave блокирует передачу болевого сигнала электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли.И есть кумулятивная выгода от нескольких процедур. Если ваш метод обезболивания вам не помогает, вам нечего терять, попробовав BioWave в вашем местном медицинском учреждении. Заполните короткую форму на сайте www.biowave.com/contact/, и один из наших специалистов свяжется с вами, чтобы облегчить процесс получения устройства BioWaveHOME. Часто вам не нужно платить за устройство или какие-либо дополнительные расходные материалы. BioWaveHOME отпускается по рецепту для пациентов с хронической и острой болью.Вы также можете связаться с нами здесь или написать нам по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Подходит ли BioWave при артрите?

Да, BioWave лечит боль, вызванную артритом. BioWave — это запатентованная более умная технология блокирования боли, которая передает терапевтические электрические сигналы через кожу в глубокие ткани прямо на поверхность волокон боли. Электрическое поле, которое формируется вокруг волокон боли, блокирует передачу сигналов боли в мозг.Технология BioWave работает так же, как химический анестетик, такой как новокаин, за исключением того, что BioWave блокирует передачу болевого сигнала электрически, а не химически. Поскольку сигнал боли блокируется нервом внутри тела, 30-минутная процедура может обеспечить длительное облегчение боли. И есть кумулятивная выгода от нескольких процедур. Если ваш метод обезболивания вам не помогает, вам нечего терять, попробовав BioWave в вашем местном медицинском учреждении. Заполните короткую форму на сайте www.biowave.com/contact/, и один из наших специалистов свяжется с вами, чтобы облегчить процесс получения устройства BioWaveHOME. Часто вам не нужно платить за устройство или какие-либо дополнительные расходные материалы. BioWaveHOME отпускается по рецепту для пациентов с хронической и острой болью. Вы также можете связаться с нами здесь или написать нам по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

BioWave просто маскирует боль или оказывает лечебный эффект?

BioWave не только блокирует болевой сигнал, но и помогает уменьшить воспаление.Однако, если боль возникает из-за структурной проблемы, такой как остеоартрит, электрическое поле BioWave не будет восстанавливать хрящ и может не иметь лечебного эффекта на сустав, но все же может быть полезным с точки зрения управления болью и снижения жесткости.

Могу ли я использовать BioWave с кардиостимулятором или дефибриллятором?

Прочтите все противопоказания и предупреждения BioWave здесь.

Могу ли я использовать BioWave при уже существующем заболевании?

Да, BioWave можно использовать для пациентов с уже существующими заболеваниями.Процедуры BioWave могут проводиться непосредственно на участках тела, на которых есть имплантированные ортопедические приспособления, такие как полные суставы, пластины, анкеры, винты или штифты, стержни или пластины. Однако BioWave нельзя использовать (противопоказано) пациентам с имплантированными кардиостимуляторами и дефибрилляторами. Если у вас есть вопросы относительно ранее существовавшего заболевания, свяжитесь с нами здесь или напишите нам по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283).

Противопоказания (Когда нельзя использовать BioWave?)

Прочтите все противопоказания и предупреждения BioWave здесь.

У меня есть компенсация работникам, могу ли я получить BioWaveHOME бесплатно?

Да, вы можете получить устройство BioWaveHOME, и расходы на него будут покрываться Компенсацией работникам. Для получения дополнительной информации или если у вас есть дополнительные вопросы, свяжитесь с нами здесь или напишите нам по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

У меня есть страховка, могу ли я получить BioWaveHOME бесплатно?

С компенсацией работникам, как правило, пациенты не оплачивают свои собственные расходы.В случае другого частного страхования может взиматься доплата или часть стоимости может быть использована против вашей франшизы. Для получения дополнительной информации или если у вас есть дополнительные вопросы, свяжитесь с нами здесь или напишите нам по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Я спортивный тренер / физиотерапевт, как мне получить BioWavePRO?

Вы можете заказать BioWavePRO прямо в BioWave.Установки BioWave покрываются компенсацией работникам, а также вторичным страхованием. Свяжитесь с нами по адресу [email protected] или 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283), и мы ответим на любые ваши вопросы, а также примем ваш заказ. Спасибо за Ваш интерес.

На сколько хватает заряда аккумулятора?

На одной зарядке аккумулятора BioWavePRO может обеспечить 18 30-минутных процедур; BioWaveHOME может предложить 4 30-минутных сеансов, а BioWaveGO — 6 30-минутных сеансов.Для получения дополнительных вопросов или информации свяжитесь с нами по адресу [email protected] или по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283). Спасибо за Ваш интерес.

Чем BioWaveGO отличается от других продуктов BioWave?

BioWaveGO — это гораздо меньшая по размерам, безрецептурная версия рецептурных нейростимуляторов BioWaveHOME и BioWavePRO. BioWaveGO использует ту же запатентованную технологию, которая была рекомендована более чем 500 профессиональным спортсменам и более чем 100 командам колледжей.Устройство простое в использовании — нет программирования — у него есть кнопка включения и кнопки ПЛЮС и МИНУС для управления интенсивностью. Устройство имеет многоцветную светодиодную гистограмму, отображающую состояние устройства. Процедура комфортная — ощущение глубокого, гладкого ощущения, поэтому пациент отлично поддается лечению. BioWaveGO также поддерживает Bluetooth, и им можно управлять с помощью простого в использовании приложения на смартфоне.

Можно ли использовать BioWave с лекарствами или другими методами лечения?

BioWave является дополнением к обезболивающим и другим лекарствам, а также может использоваться в сочетании с терапией теплом или холодом, если между электродами и теплом или холодом используется такой барьер, как полотенце или полиэтиленовая пленка.

Как мне узнать, подходит ли BioWaveHOME моим пациентам? (ДЛЯ ВРАЧЕЙ)

BioWave одобрен FDA для лечения хронической и острой боли в большинстве участков тела, включая спину, шею, плечо, локоть, колено, лодыжку и ступню. Компенсация рабочим покрывает BioWave.

Во сколько это будет стоить мне или пациенту? (ДЛЯ ВРАЧЕЙ ДЛЯ РАБОТНИКОВ КОМПАНИИ ПАЦИЕНТОВ)

Нет никаких затрат ни для врача, ни для пациента.BioWaveHOME — это покрываемая льгота для большинства рабочих, получивших компенсацию за травмы. Мы обрабатываем все согласования и выставление счетов в страховой компании вашего пациента.

Как мне вернуть BioWaveGO с бесплатной доставкой?

Пожалуйста, отправьте электронное письмо нашему консьержу BioWaveGO по адресу [email protected] или позвоните нам по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283), прежде чем инициировать возврат.

Подушечки для снятия боли иногда накладываются неправильно, из-за чего создается впечатление, что BioWaveGO работает некорректно.

Мы здесь, чтобы помочь вам.

Если вы хотите вернуть BioWaveHOME или BioWaveGO, свяжитесь с нами, заполнив короткую форму здесь , и один из наших специалистов по обслуживанию клиентов свяжется с вами, чтобы ответить на ваши вопросы.

Вы можете получить доступ к нашей платформе возврата на www.biowavego.myreturnscenter.com. Введите свой номер доставки и адрес электронной почты, чтобы начать возврат.

Могу ли я использовать свой BioWaveGO без мобильного приложения?

Да, вы можете использовать BioWaveGO без мобильного приложения.Просто используйте кнопку + или — для управления интенсивностью BioWaveGO

Есть ли у BioWaveGO консьерж-служба, которая поможет ответить на мои вопросы?

Да, у нас есть бесплатная служба консьержа, которая поможет ответить на любые вопросы о BioWaveGO.

Пожалуйста, напишите нашему консьержу BioWaveGO по адресу [email protected] или позвоните нам по телефону 1-877-BIOWAVE (1-877-246-9283).

Мы здесь, чтобы помочь вам с вашим BioWaveGO.

BioWavePENS неопиоидный, одобренный FDA, более умная технология обезболивания

В нейростимуляторе BioWavePRO используется уникальная технология смешивания высокочастотных сигналов для доставки электрических сигналов через кожу непосредственно к ноцицептивным болевым волокнам для подавления передачи боли и улучшения функций.Сигнальная технология защищена патентами США и международными патентами. Смотрите ДЕСЯТКИ против РУЧЕЙ

Чрескожные электроды BioWave стерильны, одноразовые и состоят из набора из более чем 1000 игл в пластыре диаметром 2,5 дюйма. Иглы имеют длину 0,74 мм и на ощупь напоминают липучку. Чрескожные электроды имплантируются через эпидермис непосредственно над местами, где возникает боль, и / или над источником боли на время 30-минутного лечения.

Запатентованная технология иглы

BioWave обходит сопротивление кожи и обеспечивает проводящий путь для доставки терапевтических сигналов BioWavePRO непосредственно к ноцицептивным болевым волокнам в глубоких тканях.Чрескожный электрод позволяет активному терапевтическому электрическому полю формироваться в полусфере диаметром 3,5 дюйма под каждым электродом и вокруг него. Врачи и пациенты сообщают, что BioWavePENS обеспечивает в 3 раза лучшую эффективность и в 3 раза более длительное обезболивание, чем неинвазивные электроды BioWave.

Рандомизированные контролируемые клинические исследования лечения хронической боли и послеоперационной боли показали, и пациенты сообщают, что BioWavePENS может обеспечить длительное облегчение боли, а также улучшение функции, включая увеличение диапазона движений, снижение жесткости и уменьшение мышечного спазма после однократного применения. 30-минутное лечение.Эти исследования также показали, что BioWavePENS может значительно снизить потребление опиоидов и других обезболивающих.

BioWavePENS можно использовать для лечения ноцицептивной, а также невропатической боли во многих местах, включая крестцовые, поясничные и грудные области спины, шейную область шеи, бедро, пах, колено, плечо, лодыжку, стопу, локоть, запястье и рука. Врачи сообщают об отличных результатах лечения хронической боли, вызванной нервными и опорно-двигательными проблемами, а также послеоперационной боли.Спортивные тренеры сообщают об отличных результатах при лечении боли при неврите, острых и хронических тендинопатиях, проблемах со связками, таких как растяжения суставов и триггерные точки.

Клинический обзор BioWavePENS

Узнать больше

Whitening Capsule Ampoule (30ml), केयर कॉस्मेटिक्स, की देखभाल के लिए प्रसाधन — Anandvrddhi, New Delhi

Whitening Capsule Ampoule (30ml), केयर कॉस्मेटिक्स, की देखभाल के लिए — Anandvrddhi, New Delhi | ID: 22794124933

Описание продукта

ACCOJE WHITENING CAPSULE AMPOULE — это концентрированная ампула, содержащая капсулы с осветляющей энергией, которые придают красивый блеск тусклой коже.Микрокапсулы на основе витамина С, облегчение веснушек, отбеливание, функциональная яркость кожи, улучшение меланина и тона кожи. Клинические испытания завершены.

• Повышение яркости и пигментации меланина всего за 2 недели использования.
• Синергетический эффект двойного отбеливания с помощью микрокапсул.
• Отбеливающий крем осветлит тон кожи и сделает ее прозрачной и молочно-белой.
• MADE IN JEJU: Чистая и яркая энергия, найденная в окружающей среде Чеджу.
• Приятная для кожи формула без 7 ВРЕДНЫХ ИНГРЕДИЕНТОВ (6 типов парабенов, бензофенон, искусственный ароматизатор, имидазолидинилмочевина, смолистый пигмент, вредные минералы, животное масло)

Заинтересовал этот товар? Получите последнюю цену у продавца

Связаться с продавцом

Изображение продукта

---

О компании

Год основания2019

Юридический статус фирмы Партнерство Фирма

Характер BusinessExporter

Количество сотрудников До 10 человек

Годовой оборот До рупий50 лакх

Участник IndiaMART с января 2020 г.

GST07ABOFA1700G1ZT

Код импорта и экспорта (IEC) ABOFA *****

Вернуться к началу

1

Есть потребность?
Получите лучшую цену

1

Есть потребность?
Получите лучшую цену

Высококонтрастное блочное окрашивание нейрональной ткани для автоэмиссионной сканирующей электронной микроскопии

Nat Protoc.Авторская рукопись; доступно в PMC 2013, 4 июля.

Опубликован в окончательной отредактированной форме как:

PMCID: PMC3701260

NIHMSID: NIHMS477554

Хуан С. Тапиа

¹ Молекулярная и клеточная биология, Гарвардский университет , США

Нараянан Кастури

¹ Молекулярная и клеточная биология, Гарвардский университет, Кембридж, Массачусетс, США

Кеннет Хейворт

¹ Молекулярная и клеточная биология, Гарвардский университет, Кембридж, Массачусетс, США

¹ Молекулярная и клеточная биология, Гарвардский университет, Кембридж, Массачусетс, США

Jeff W.Лихтман

¹ Молекулярная и клеточная биология, Гарвардский университет, Кембридж, Массачусетс, США

Стивен Дж. Смит

² Кафедра молекулярной и клеточной физиологии, Медицинская школа Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния, США

Джоанн Бьюкенен

² Департамент молекулярной и клеточной физиологии, Медицинская школа Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния, США

¹ Молекулярная и клеточная биология, Гарвардский университет, Кембридж, Массачусетс, США

² Департамент молекулярной биологии. и клеточная физиология, Медицинский факультет Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния, США

Окончательная отредактированная версия этой статьи издателем доступна в Nat ProtocSee другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.

Abstract

Обычные методы пост-окрашивания тяжелых металлов на тонких срезах дают контраст, но часто вызывают загрязнение. Чтобы избежать этой проблемы, мы протестировали несколько методов окрашивания en bloc для контрастирования тканей в серийных срезах, установленных на твердых подложках, для исследования с помощью полевого эмиссионного сканирующего электронного микроскопа (FESEM). Поскольку для получения изображений сечения с помощью FESEM требуется, чтобы образцы имели более высокий контраст и большую электропроводность, чем образцы просвечивающего электронного микроскопа (ТЕМ), в нашей методике используется пропитка осмием (OTO), чтобы сделать образцы проводящими, при этом сильно окрашивая мембраны для исследований сегментации.Комбинируя этот этап с другими классическими окрашиваниями тяжелого металла en bloc , включая уранилацетат, аспартат свинца, сульфат меди и цитрат свинца, были получены чистые, высококонтрастные образцы TEM и SEM нервной системы насекомых, рыб и млекопитающих. Этот протокол занимает 7–15 дней для подготовки ткани, залитой смолой, вырезания срезов и получения серийных изображений срезов.

Введение

Более 50 лет просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) тонких срезов была основой клеточной биологии.Первые электронные микроскописты быстро осознали ценность получения серийных срезов для сбора трехмерной (3D) информации ¹ . Применение техники серийных срезов для исследования трехмерных микросхем нервной системы началось более 30 лет назад ² . Недавно были разработаны новые методы изображения больших объемов тканей с целью понимания взаимосвязи в нервной системе ³ . С появлением серийного блока граней (SBF-SEM) ⁴ и сфокусированного ионного пучка (FIB) ⁵ методов полностью автоматизированной электронной микроскопии объемных изображений и методов сбора длинных серий ультратонких срезов на большом покровном стекле ⁶ или лента ⁷ подложки, режим отражения Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) выходит на передний план электронной микроскопии трехмерной реконструкции.Хотя традиционные методы ПЭМ обеспечивают более высокое разрешение и контрастные изображения, они создают более серьезные проблемы для сбора и получения изображений больших объемов образцов из-за небольших размеров сетки и присущей хрупкости тонкопленочных поддерживающих подложек, необходимых для передачи ЭМ. Более того, новые инструменты SEM с полевой эмиссией (FESEM) обеспечивают полезное разрешение, которое начинает приближаться к разрешению, полученному с помощью TEM, в то время как оптимизированные методы окрашивания en bloc , которые мы описываем здесь, обеспечивают контраст, который также начинает конкурировать с тем, который достигается с помощью TEM.

Преимущества FIB- и SBF-SEM, которые позволяют собирать сотни или тысячи автоматически вырезанных, идеально выровненных тонких срезов, по сравнению с TEM серийных сечений, для чего требуются высококвалифицированные методы сбора и визуализации. Однако эти участки теряются безвозвратно из-за деструктивного характера процесса FIB и SBF-SEM. Напротив, автоматический сбор тонких срезов на ленту и матричная томография, где серийные ленты тонких срезов переносятся на покрытые углеродом покровные стекла (), позволяют проводить структурные и мульти-маркерные исследования иммунной метки одного среза.Кроме того, образцы, закрепленные как на ленте, так и на покровном стекле, позволяют многократно отображать полные срезы в нескольких местах без вмешательства столбиков сетки или нестабильных пленок формвар для FESEM (). Наконец, большой размер камеры FESEM легко вмещает последовательные секции, установленные на этих больших держателях образцов, то есть покровные стекла диаметром 60 мм и 4-дюймовые кремниевые пластины.

Подготовка серийных шлифов. (a) Лицевая сторона блока с параллельными верхним и нижним краями. (b) Покровное стекло с углеродным покрытием, погруженное в нож Jumbo Histo.Используйте инструмент для наращивания ресниц, чтобы отделить ленту (стрелка) от лезвия (1) и переместить ее, чтобы прикрепить к металлической планке, удерживающей воду на месте (2), затем медленно и осторожно снимите покровную пленку с лодки, чтобы лента легла ровно. (c) FESEM-изображение ленты ультратонких серийных срезов, нанесенных на покровное стекло с углеродным покрытием. Шкала 100 мкм. Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашего институционального комитета по уходу и использованию животных.

Несмотря на то, что в области визуализации и вырезания срезов были достигнуты значительные успехи, те же самые основные методы подготовки тканей, фиксации и окрашивания тяжелых металлов не претерпели значительных изменений за многие годы.Мы объединили и сравнили несколько классических методов подготовки ЭМ для достижения наилучшей комбинации окрашивания для сегментации нейрональных мембран на изображениях FESEM. Здесь мы описываем метод, который может быть применен к ультраструктурным исследованиям многих типов тканей, как для FESEM, так и для TEM. Для серийных 3D-реконструкций различных типов тканей следует учитывать, какие тканевые элементы необходимо улучшить для визуализации, и выбрать для этого подходящее окрашивание тяжелых металлов.

Окрашивание En bloc применимо как для ПЭМ-, так и для FESEM-визуализации, и выгодно иметь возможность напрямую обращаться к электронному микроскопу для просмотра тонких срезов, не беспокоясь о дальнейшем последующем окрашивании.Основным ограничением этого метода может быть недостаточная контрастность из-за неравномерного проникновения пятен и хрупкость ткани из-за инфузии тяжелых металлов. Тщательное внимание к приготовлению раствора, времени инкубации и соответствующему промыванию минимизирует фон. Точное обращение с образцом на каждом этапе для уменьшения загрязнения и потери тканей является обязательным условием при использовании метода импрегнации осмием.

Мембранные контрастирующие вещества

Использование тяжелых металлов в методах окрашивания срезов с использованием уранилацетата и цитрата свинца ^9,10 широко распространено в классических исследованиях просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ).Увеличение контраста, наблюдаемое в биологической ткани, в основном связано с высоким сродством ионов уранила и свинца к белкам, нуклеиновым кислотам и гидроксильным группам в углеводах и РНК соответственно ¹¹ . Однако эти положительные пятна иногда загрязняют срезы электронно-плотными осадками. В частности, свинцовые пятна известны тем, что вызывают мелкий перец, похожий на осадок, который портит внешний вид изображений с высоким разрешением. Кроме того, зачастую утомительное время, затрачиваемое на окрашивание и мытье сеток, часто приводит к повреждению формварных пленок и возникновению разрывов на тонких срезах.

В 1960 году Селигман и Ханкер разработали метод OTO (тетроксид-тиокарбогидразид осмия (TCH) -осмий) ¹² , в котором тиокарбогидразид использовался в качестве связующего агента в процессе, называемом пропиткой осмием. Осмиофильный ТСН усиливает окрашивание осмием липидных компонентов, особенно клеточной мембраны. TCH работает, прикрепляясь к осмию, уже присутствующему при первоначальной фиксации осмия, и действует как мостик, позволяющий отложить дополнительный осмий на исходные участки осмия.Еще одним преимуществом использования TCH является то, что образец становится более проводящим для электронов за счет дополнительного окрашивания металла. Это помогает предотвратить избыточную зарядку образца в SEM ^{13, 14,15} .

Было также показано, что использование фиксаторов с пониженным содержанием осмия ^16,17 повышает контрастность образцов и сохраняет волокна и мембраны. Добавление ферри- или ферроцианида калия в раствор для пропитки снижает содержание осмия (OsFeCN), делая его более реактивным ¹⁸ .Сниженный уровень осмия лучше окрашивает мембраны и усиливает маркировку саркоплазматического ретикулума и гранул гликогена.

Использование имидазола, третичного амина, применялось для усиления осмификации липидов, в частности липидов клеточных мембран и ненасыщенных жирных кислот ¹⁹ . В дополнение к усиленному контрасту плазматической мембраны, все межклеточные мембраны, включая мембраны синаптических везикул, аппарата Гольджи, эндоплазматического ретикулума, митохондрий и эндосом, имеют улучшенный контраст ²⁰ .

Коллекция серийных сечений

Множество красивых серийных исследований TEM срезов предоставили трехмерные детали и взаимосвязи структур в нейрональной ткани, как показали исследования нескольких лабораторий ^{21, 22,23,24,25} . В этих традиционных исследованиях серийных сечений срезы собирают на сетках с пазами, покрытыми формваром толщиной 3 мм. Успешный сбор требует отличных ручных навыков и сноровки и часто является серьезной ловушкой как для новичков, так и для экспертов. Например, секции могут приземлиться на край медной сетки, складываться или быть затронутыми неровностями в лежащей ниже опорной пленке ²⁶ .Кроме того, пленки из формвара печально известны своей сложностью в отливке, чрезвычайно хрупкими и склонными к нестабильности и разрушению под действием электронного луча. Еще один недостаток — размер лицевой стороны блока, который необходимо делать очень маленьким, чтобы можно было разместить большое количество секций на сетке 3 мм. Этого достаточно для небольших участков ткани, но становится проблематичным при реконструкции больших участков мозга в больших объемах. Таким образом, наличие серийных секций на гибкой ленте или покровных стеклах с углеродным покрытием дает несколько преимуществ по сравнению с щелевыми решетками, покрытыми формваром.Самым большим преимуществом является прочность несущего материала и простота обращения. Например, использование ножа Jumbo Histo делает относительно простым захват ленты серийных срезов на покровном стекле (). Большой размер лодочки вмещает покровное стекло, с которым намного проще обращаться, чем с многочисленными сетками с формварным покрытием. Кроме того, на покровное стекло размером 20 x 60 мм () можно помещать все больше и больше секций по сравнению с сеткой пазов с покрытием из формвара 3 мм.

Разработка протокола окрашивания

Наши собственные поиски улучшения контрастности встроенных образцов начались с разработки SBF-SEM для картирования нейронных цепей, инструмента, который требовал высококонтрастных образцов для визуализации.Протокол en bloc ²⁷ для SBF-SEM исследований артериальной стенки был расширен и доработан в наших лабораториях специально для окрашивания мембран и элементов нервной ткани. Мы включили использование OTO, потому что он использовался, чтобы сделать образцы проводящими для исследований SEM ²⁸ .

Чтобы найти лучший протокол окрашивания, мы протестировали множество перестановок различных комбинаций водного или забуференного осмия, имидазола осмия, тиокарбогиразида, карбогидразида, свинца свинца в блоке , аспартата свинца в блоке , феррицианида калия и этанолового спирта. фосфовольфрамовая кислота (ФТА).Все они были протестированы в присутствии или в отсутствие уранилацетата en bloc , чтобы определить лучшую комбинацию и время для получения однородной высококонтрастной ткани. Многие вариации этих методов окрашивания были разработаны за последние несколько лет (Пятна для отслеживания нервных цепей с помощью электронной микроскопии, JB, Winfried Denk, Heinz Hortsmann, SJS, Стюарт Томпсон и Рикардо Валенсуэла, Society for Neurosci. Abstract, 2005; Staining за электронно-микроскопический анализ нейронных схем, Дж.Б. и С.Д.С., Общество неврологов. Abstract, 2007) и недавно использовался в SSEM (серийная электронная микроскопия лица) капилляров в легких ²⁹ и связности сетчатки ³⁰ .

Мы изучили различные образцы тканей, которые включали кору головного мозга мышей, Drosophila центральную и периферическую нервную систему и рыбок данио Danio rerio оптическую оболочку и сетчатку. Образцы рыб и мух фиксировали и обрабатывали в микроволновой печи, в то время как мозг мыши фиксировали перфузию и обрабатывали либо на стенде, либо в микроволновой печи.После заделки образцов и микротомии полутонкие срезы были исследованы на структурную целостность (). Ультратонкие срезы (70 нм) были вырезаны и непосредственно исследованы для оценки с помощью ПЭМ без последующего окрашивания перед подготовкой срезов для FESEM. Только образцы с повышенным контрастом и хорошей структурой были дополнительно обработаны для FESEM. Серийные ленты срезов для исследований FESEM собирали либо на каптоновую ленту с углеродным покрытием (DuPont), либо на покровные стекла с углеродным покрытием и желатиновым покрытием, и исследовали с помощью FESEM.Для одного исследования коры головного мозга мышей были отображены ленты на покровных стеклах, и программа Reconstruct ³¹ была использована для создания трехмерного изображения индивидуального дважды иннервируемого синапса ().

LM микрофотография неокрашенного полутонкого среза 0,5 микрон залитой эпоксидной смолой коры головного мозга мыши показывает четкие клеточные детали и хороший контраст.

NCB Тело нейрональной клетки, кровеносный сосуд BV. Шкала 10 мкм. Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашего институционального комитета по уходу и использованию животных.

Набор из 3 репрезентативных изображений FESEM срезов 70 нм из серии из 25 на покровном стекле с углеродным покрытием. Стрелки (a, b) и звездочки (c) отмечают два разных синаптических контакта на дважды иннервируемом позвоночнике. Панель d показывает трехмерную реконструкцию двойной иннервации и сопутствующих синаптических пузырьков красным и синим цветом. Масштабная шкала 200 нм. Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашего институционального комитета по уходу и использованию животных.

Сравнение с другими методами

Для получения высококонтрастных образцов для электронной микроскопии можно использовать несколько различных подходов.Комбинация соединений осмия, урана и свинца является основными пятнами от тяжелых металлов, используемыми для исследований ПЭМ, и необходимо протестировать различные комбинации и / или рецепты для достижения оптимальных результатов для каждого отдельного препарата. Важно учитывать конечную цель и то, какие клеточные детали необходимо улучшить. В нашем случае мы хотели иметь сильно окрашенные нейронные мембраны, чтобы облегчить сегментацию для трехмерных реконструкций из серийных срезов. Этот протокол может быть адаптирован для работы с широким спектром типов тканей для приложений в нескольких областях, включая клеточную биологию, патологию, биологию развития и иммунологию.

Четырехокись осмия окрашивает и фиксирует ткани, одновременно действуя как протрава, усиливая другие пятна ¹¹ . Уменьшенные фиксаторы осмия дают более высокий контраст, особенно мембран и частиц гликогена ¹⁶ . Сообщалось, что восстановленные фиксаторы осмия изменчивы из-за взаимодействия химической реакции с клеточными компонентами ³² , однако у нас не было этой проблемы. Осмид имидазол (Осмид) также сильно контрастирует с мембранами, оставляя электронно-просветление цитоплазмы и выделяя микротрубочки.Однако обратная сторона использования имидазольных соединений заключается в том, что они имеют тенденцию вызывать выпадение осмия в осадок из раствора, если pH не контролируется тщательно. При выборе осмиевого фиксатора необходимо оценить ультраструктурные детали, которые необходимо реконструировать или сегментировать.

Уранилацетат (UA) обычно используется в обычном препарировании ткани для ПЭМ, в первую очередь как окрашивание срезов, но также en bloc при обработке влажной ткани. Это относительно неспецифическая окраска, в первую очередь окрашивающая белки.Он может быть менее эффективным при использовании en bloc по сравнению с окрашиванием срезов и может реагировать с буферами, используемыми во время обработки образца. Часто добавление этанола или метанола к окрашивающему раствору улучшает проникновение в ткань. Использование уранилацетата в сочетании со свинцовыми пятнами имеет аддитивный эффект, поскольку UA действует как протрава для отложения большего количества пятен ³³ . Мы рекомендуем исследователю оценить образец с водным красителем UA en bloc и без него, чтобы определить, какой метод обеспечивает приемлемый контраст.

Соединения свинца обычно используются для исследований ТЕА и окрашивают различные клеточные компоненты, включая мембраны, нуклеиновые кислоты и гликоген ³⁴ . Основным недостатком красителей, содержащих свинец, является склонность свинца к образованию нерастворимых осадков карбоната свинца при воздействии углекислого газа. Использование свинцовых красителей en bloc позволяет избежать осаждения осадка карбоната свинца, который образуется во время окрашивания срезов на столе, при этом повышая электронную плотность образца ³⁵ .Комбинация цитрата свинца и сульфата меди, используемых вместе en bloc , обеспечивает окончательно окрашенные мембраны, оставляя при этом электронно-просветление цитоплазмы. Согласно Hyatt ³³ аспартат свинца en bloc краситель проникает медленнее, чем цитрат свинца, и ультраструктурные детали могут быть нарушены. В наших руках мы обнаружили, что аспартат свинца en bloc не влияет на качество образца (см.). Напротив, сообщалось, что комбинация восстановленного феррицианидом калия осмия и аспартата свинца en bloc свинец дает наилучшие высококонтрастные результаты для электронно-микроскопической радиоавтографии ³⁶ .

FESEM изображения ROTO (восстановленный осмий OTO) / en bloc окрашивание аспартатом свинца ткани мозга взрослых мышей. Обратите внимание на однородное окрашивание ткани и отсутствие загрязнения, полученное после использования этого метода. Репрезентативные области (квадраты) рядом с клеточными сомами (a1) и нейропилем (a2) отображаются с более высоким разрешением. Обратите внимание на высококонтрастное окрашивание всех клеточных мембран, миелина и органелл, включая митохондрии, аппарат Гольджи, эндоплазматический ретикулум, рибосомы и синапсы.Полоски соответствуют 10 (a), 1 (a1) и 1 (a2) мкм соответственно. Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашего институционального комитета по уходу и использованию животных.

Мы использовали пропитку осмием в сочетании либо с забуференным имидазолом, либо с восстановленным феррицианидом калия осмием, и обнаружили, что она обеспечивает превосходный контраст мембран как для исследований ПЭМ, так и при исследованиях с помощью SEM. Это также делает образец проводящим за счет увеличения образования вторичных электронов, что позволяет избежать зарядки образца.

Наш метод позволяет избежать потери материала на стадии окрашивания, обеспечивает чистые и равномерно окрашенные серийные срезы, экономя время. Клеточные детали, включая синаптические пузырьки, микротрубочки, эндоплазматический ретикулум, постсинаптические плотности, аппарат Гольджи и клеточные мембраны, легко различимы в FESEM (). Кроме того, микроволновая фиксация приводит к улучшенной структуре, особенно для трудно сохраняемых образцов, таких как мозг рыбок данио () (J.B., Meyer, M., Niell, C. & S.J S. Mol.Биол. Cell (Suppl), аннотация 672, 2003) и Drosophila ³⁷ . Было обнаружено, что этот протокол хорошо работает для широкого спектра нейронных тканей, включая мозг мышей, плодовую мушку , Drosophila () и рыбок данио , Danio rerio как для исследований FESEM, так и для ТЕМ ( Дополнительные рисунки 1 и 2).

FESEM-изображения тонких срезов эпоксидной смолы коры головного мозга мыши en bloc , окрашенные Osmid / OTO / цитратом свинца сульфатом меди в течение ночи при 20 ° C.

a) Ультратонкий срез с малым увеличением 70 нм, показывающий хорошо контрастирующий образец. NCB, тело нейрональной клетки BV, кровеносный сосуд. Шкала 2 мкм.

b) При большем увеличении области, выделенной рамкой, видны высококонтрастные мембраны и миелин. Стрелка указывает на синапс позвоночника с электронно-плотной постсинаптической плотностью. Масштабная шкала 200 нм. Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашего институционального комитета по уходу и использованию животных.

3View Block Face FESEM of Zebrafish Optic Tectum.

a) 3View Block Face FESEM-изображения личинок 10 dpf рыбок данио en bloc , окрашенных Osmid, OTO, цитратом сульфата меди и свинца в течение ночи при 37 ° C. Шкала 100 мкм.

b) При большем увеличении 3View FESEM-изображение оптического тектума, показывающее хороший контраст и неповрежденную структуру. En bloc окрашивание, как на панели (а). Шкала 2 мкм.

Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашего институционального комитета по уходу за животными и использованию.

FESEM-изображения ультратонких срезов мозга взрослых дрозофил, закрепленных на каптоновой ленте. (a) обзор всего мозга (b) при большем увеличении области в рамке на a показаны нейропиль и (c) пучки аксонов. При большем увеличении обведенной рамкой области на (c) показаны детали нейропиля на d и отличный контраст мембран и синаптических пузырьков. Окрашивание Osmid / OTO en bloc . Масштабные линейки: a — 40 мкм, b — 20 мкм, c — 5 мкм, d — 1 мкм.

Использование животных в этом эксперименте проводилось в строгом соответствии с руководящими принципами нашей институциональной комиссии по уходу за животными и их использованию.

Схема эксперимента

Микроволны в сравнении со стендовой обработкой

Микроволновая энергия использовалась в качестве метода подготовки тканей для световой и электронной микроскопии в течение многих лет ^{38, 39,40,41} . Микроволновая энергия улучшает качество фиксации, значительно ускоряет время обработки и повышает антигенность и иммунную метку ^42,43 . Противоречивые представления о природе фиксации микроволн остаются относительно механизмов нагрева в сравнении с микроволновыми эффектами.Считается, что эффект нагрева улучшает проникновение реагентов и ускоряет фиксацию ⁴⁴ . В других публикациях на основании исследования глобулярных белков ⁴⁵ и повышенной скорости деминерализации костей независимо от температуры ⁴⁶ предполагалось, что микроволновые эффекты были нетепловыми. Мы согласны с выводом о том, что микроволновый эффект сам по себе приводит к улучшенной структуре и сокращению времени обработки ⁴⁷ . Таким образом, более новые модели лабораторных микроволновых печей (т.е. Ted Pella Biowave®) оснащены охладителями нагрузки и контроллерами мощности для тщательного контроля температуры образца на этапах обработки. В этом протоколе этапы первичной подготовки выполняются с использованием имеющейся в продаже специальной микроволновой печи. При использовании в сочетании с пропиткой осмием рекомендуется использовать инфильтрацию смолы в лабораторных условиях вместо инфильтрации смолы с помощью микроволн, чтобы обеспечить адекватное проникновение смолы в сильно осмифицированную ткань.Все остальные этапы, включая фиксацию и обезвоживание, можно выполнить с использованием микроволновой печи или настольного метода, если специальная лабораторная микроволновая печь недоступна.

Fixation

Препараты

рыбок данио и Drosophila обрабатывали в микроволновой печи Ted Pella, оснащенной контроллером мощности, рециркуляцией воды и охладителем. Мышей перфузировали через сердце смесью глутаральдегида и параформальдегида с использованием системы Perfusion One или Perfusion Two (Leica).После того, как мозг был извлечен у животного, он был разрезан с помощью вибратома на срезы толщиной 100–200 мкм и дополнительно обработан для электронной микроскопии с использованием методов микроволновой обработки или лабораторной обработки, как описано в протоколе.

Технические рекомендации

Первоначальная фиксация альдегида очень важна для оптимизации хорошей ультраструктуры. Важно работать быстро и подвергать ткань воздействию фиксирующего раствора, особенно во время перфузионной фиксации (см. Шаг B iii).При рассечении ткани действовать быстро и быстро погрузить в фиксатор. Мы обнаружили, что микроволновая фиксация лучше всего подходит для образцов рыбок данио и дрозофилы, а быстрая и тщательная перфузия лучше всего работает для мозга млекопитающих. Рыбкам данио особенно сложно получить качественную ультраструктуру нервной системы, возможно, из-за содержания воды в тканях. Здоровье животных и точное внимание к деталям важны при подготовке и запуске тканей для ЭМ-исследований, будь то SEM или TEM.Для достижения наилучшего результата используйте только свежеприготовленные реагенты и здоровых животных и попробуйте несколько партий животных или клеток. Часто для достижения качественного результата требуется несколько попыток.

Хотя пропитка осмием OTO делает ткань более плотной для электронов и проводящей, она также делает ткань более хрупкой и трудной для инфильтрации, особенно если объем большой. Важно найти правильное количество отложений осмия, хорошо промыть дистиллированной водой между этапами и тщательно обезвожить и проникнуть в ткань.Во время обработки образцов следует осторожно обращаться с ними, используя тонкие кисти, чтобы избежать повреждения тканей.

Во время обработки следует использовать свежеоткрытые флаконы с пропиленоксидом для заключительных стадий дегидратации, а свежие смеси эпона следует использовать для заливки из-за возможного загрязнения водой. Перед тем, как разрезать блоки, необходимо тщательно затвердеть в течение двух дней. При тонкой срезке блоков этап обрезки имеет решающее значение. Крайне важно, чтобы стороны были равномерно наклонены на трапеции, а верх и низ блока были параллельны, чтобы получилась прямая лента.Можно использовать либо алмазный нож для обрезки, либо только что открытое лезвие бритвы и устойчивые руки.

Наконец, важно провести соответствующий контроль, если результаты неодинаковы: проверка pH и осмолярность фиксатора, приготовление свежих растворов, исключение этапов OTO или свинца en bloc и проба в разные моменты времени. Чтобы адаптировать этот протокол к различным типам тканей, необходимы некоторые методы проб и ошибок. Наш протокол представлен как наиболее подходящий для нашего исследуемого материала, но могут использоваться различные варианты выбора фиксаторов и смесей смол.Мы рекомендуем ознакомиться с типами пятен, доступных для всех ЭМ-исследований, и настоятельно рекомендуем книгу «Пятна и цитохимические методы» для справки.

Материалы

Фиксация и пропитка осмием

• Солевой раствор с фосфатным буфером (Sigma Cat. No. P3813-10PAK). ! ВНИМАНИЕ! Избегать контакта с кожей и глазами. Избегайте вдыхания.

• Натрий-какодилатный буфер 0,2 М, pH 7,4 (EMS, кат. № 11650) ! ВНИМАНИЕ! Раздражает при вдыхании или контакте с кожей, используйте перчатки и работайте в вытяжном шкафу.

• Ампулы с глутаровым альдегидом 8% об. / Об. Для микроволновой фиксации (EMS, каталожный № 16000), раствор 50% об. / Об. Для фиксации перфузии (каталожный номер EMS 16316) ! ВНИМАНИЕ! Токсично при вдыхании и контакте с кожей. Надевайте перчатки, используйте вытяжной шкаф.

• Четырехокись осмия 4% мас. / Об. (Кат. Номер EMS 19150) ! ВНИМАНИЕ! Сильный окислитель, очень токсичен при вдыхании или контакте с кожей, используйте защитную одежду, средства защиты глаз, используйте вытяжной шкаф.

• Водный раствор параформальдегида 16% или 32% мас. / Об.(Каталожный номер EMS 15714S) ! ВНИМАНИЕ! Токсично при вдыхании, Контакт с кожей. Используйте вытяжной шкаф.

• Тиокарбогидразид (Sigma Cat No. T-2137) ! ВНИМАНИЕ! Токсично, не попадать в глаза или на кожу, не вдыхать пыль.

• Имидазол (Sigma Cat. No. 10125-25G). ! ВНИМАНИЕ! Токсично, едко, может вызвать ожоги. Надевайте защитную одежду, перчатки и защитные очки.

• Феррицианид калия (каталожный номер 20150) -3% в 0.2M какодилатный буфер. ! ВНИМАНИЕ! Порошок раздражает глаза, избегайте контакта.

En Bloc Пятна

• Нитрат свинца (каталожный номер EMS 17900) ! ВНИМАНИЕ! Токсично при вдыхании, избегать контакта с кожей и глазами.

• Сульфат меди (каталожный номер Fisher. {«Type»: «entrez-нуклеотид», «attrs»: {«text»: «S75111», «term_id»: «797371», «term_text»: «S75111 «}} S75111). ! ВНИМАНИЕ! Токсично при попадании на кожу и в глаза.Надевайте перчатки, защищайте глаза.

• Дигидрат тринатрийцитрата (Sigma-Aldrich Cat. No. C8532).

• 1N раствор гидроксида натрия (каталожный номер EMS 21170-01 S). ! ВНИМАНИЕ! Токсичное вещество вызывает ожоги. Избегать попадания на кожу и глаза. Надевайте защитную одежду, перчатки и используйте защитные очки.

• L-аспарагиновая кислота (Sigma Cat No. A4534).

• Уранилацетат (E.M.S. кат. № 22400). ! ВНИМАНИЕ! Токсичен при вдыхании, взвесьте под капюшоном и наденьте перчатки.

ЭМ дегидратация и инфильтрация

• Этиловый спирт, серия Rossville Gold Shield (кат. № 412804), серия 50, 70, 95, 100% (об. / Об.). ! ВНИМАНИЕ! Воспламеняется, надевайте перчатки.

• Бидистиллированная вода.

• Оксид пропилена (S.P.I. Кат. № 02524-AA). Флакон 30 мл. ▲ CRITICAL Бутылки небольшого размера важны для предотвращения загрязнения водой.

  ! ВНИМАНИЕ! Воспламеняется, избегать контакта с кожей, использовать перчатки, защитную одежду, использовать вытяжной шкаф.

• Смола Embed 812 (EMS, кат. № 14120) Набор для заливки с BDMA (EMS, кат. № 11400-25) в качестве ускорителя. ! ВНИМАНИЕ! Токсично при вдыхании и контакте с кожей. Надеть перчатки, защитную одежду, использовать вытяжной шкаф.

Оборудование

Перфузионная и иммерсионная фиксация

• Система Perfusion One и Perfusion Two (MyNeuroLab, Leica Microsystems, Ричмонд, Иллинойс)

• Пинцет S0003

• Пинцет

• Тед Пелла, кот.№ 439-5)

• Нитриловые перчатки с алоэ можно заказать на небольшой заказ (Fisher Scientific 19-041-172)

• Стеклянная или пластиковая колпачковая банка

• Пластиковые чашки Петри диаметром 35 мм

• Лезвия для бритв

• Vibratome 1000 (Vibratome Co., Сент-Луис, Миссури)

• Клей Quick Bond Super Cyanoacrylate (EMS, кат. № 72588)

• Кисть для точечной краски

• cel

  блюдо с 12 полостями (Fisher Scientific Cat.№ S337241)

• Пластиковая чашка Петри 150 мм x 20 мм, необработанная чашка (USA Scientific Cat. No. CC7672-3614)

• Стеклянные сцинтилляционные пробирки 20 мл с крышкой (Fisher Scientific Cat. No. 03-337-14)

Обработка и внедрение ЭМ

• Держатель флаконов на стойке из пеноматериала (VWR Кат. № 82002-588 (CS))

• Пробирки с крышками 4 мл National Scientific (VWR Cat. № 66030-668)

• Капсулы для пчел с плоским дном (кат.№ 70021)

• Держатель капсулы для пчел (каталожный номер EMS 69915-01)

• Лабораторная печь для заливки (Thermolyne тип 19200)

• Лабораторная микроволновая печь (модель Ted Pella, кат. № 3451, оснащенная регулятор мощности, рециркулятор воды с постоянной температурой и холодное пятно) ▲ CRITICAL Используйте только специальную лабораторную микроволновую печь с регулируемой мощностью и охладителем. Настоятельно рекомендуется использовать микроволновую печь Ted Pella. Новейшая модель — Biowave (Ted Pella 36500).

• Стаканы Tri-pour 100 мл с крышками (каталожный номер Fisher Scientific S30685A)

Обрезка блока

• Триммер Leica EM (Leica Microsystems, Inc, Bannockburn, Il.)

• Пылесос без мешка с фильтром Hepa (соединен с триммером EM для сбора эпоксидной пыли)

• Лезвия для бритв (одинарная кромка .009)

• Пресс для капсул жемчуга (кат. № SPI 02400-AB)

Защитное стекло Препарат

• Желатин из свиной кожи 300 цветков Sigma Cat.№ G1890

• Сульфат хрома-калия Sigma Aldrich Cat. № 243361

• 22 x 60 мм, номер 1,5 стеклянные покровные стекла (VWR)

• покровные стекла с желатиновым покрытием (см. Этап подрезки)

• Plasma Prep III Plasma etcher (Structure Probe Inc Cat. No. 11050)

• Модульная настольная система вакуумного покрытия Cressington 308R-EM (Ted Pella, Inc., кат. № 95000-20-220), оснащенная монитором толщины кристаллов кварца.

• Специально разработанный держатель для нескольких покровных стекол, изготовленный инженерной мастерской S.I.N.T.I.N.

• Углеродные стержни с двойным острием, кончик двойной шейки, длина 06,2×38 мм (01/4 ″ x1-1 / 2 ″ L), 60 Гц (Ted Pella, Inc., кат. № 93010)

Thin and Semi -тонкие срезы

• Diatome Ultra Diamond Knife (EMS / Diatome 45 ° 4 мм Кат. № 40-UL)

• Инструмент для ультратриминга Diatome (EMS / Diatome)

• Diatome Histo Knife (EMS / Diatome 45 ° 6 мм Кат.№ 80-HIS)

• Diatome Histo Jumbo Knife (EMS / Diatome 45 °, 6 мм, кат. № 80-HISJ)

• Ультрамикротом (Leica Ultracut E или новее, Leica, Microsystems, Inc. Bannockburn, Ил.)

• Стеклянные слайды (Goldseal)

• Углеродное и желатиновое покрытие 22 x 60 мм 1,5 стеклянные покровные стекла

• Специальный клей для серийных секций Контактный цемент DAP Weldwood, 3 унции. (в хозяйственных магазинах или на Amazon.com) разбавить ксилолом в соотношении 1: 2.

• Раствор красителя Толудин синий (каталожный номер EMS 52040) в шприце с фильтром

• Набор Hot Plate на уровне 2

• Дистиллированная вода Milli Q

• Инструмент для ресниц

• Петлевой инструмент (Ted Pella, кат. № 13092)

• Маленький металлический стержень длиной около 4 мм для удержания воды на лодке с алмазным ножом

• Пинцет Dumont обратного действия (N5AC, сверхтонкие наконечники EMS, кат.72856-D)

• Подогреватель предметных стекол Barnstead Lab-Line 26025)

• Вакуумный эксикатор для хранения покровных стекол с секциями (Desi-Vac S97607 марки Fisher)

• Пластиковая почтовая программа для стекол с углеродным покрытием ( VWR Cat. No. 95042-208)

• Медная лента (Ted Pella Cat. No. 16072-1)

FESEM Imaging

• Zeiss Gemini FESEM Carl Zeiss, Thornwood, NY

• EVO-4QB5D165R четырехквадрантный твердотельный диодный детектор обратного рассеяния диаметром 16 мм Carl Zeiss, SMT Inc, Peabody, MA

• Программное обеспечение Fibics для сканирования и управления стадией, Оттава, Канада

Настройка реагентов

Подложка покровных стекол раствор Растворить 1.5 г желатина в 290 мл дистиллированной воды при нагревании до 60 ° C. Растворите 0,15 г сульфата хрома-калия в 10 мл dd воды. Когда раствор желатина остынет до 37 ° C, объедините два раствора, профильтруйте и вылейте в резервуар для окрашивания. Используйте только свежеприготовленные растворы. Окуните в раствор покровные стекла. Дайте высохнуть в течение ночи в непыльной среде.

Tricane (метансульфонат трикаина , TMS, MS-222 Sigma Cat. No. A-5040). Добавьте 40 мг в 10 мл воды.Сделайте свежий прямо перед использованием.

Какодилатный буфер , приобретенный в EMS, 0,2М, pH 7,4. Готов к использованию. Хранить при 4 ° C.

Альдегидные фиксаторы Используйте взломщик ампул, чтобы открыть флаконы с фиксатором. Для фиксации перфузии добавьте 20 мл параформальдегида 32% масс. / Об. К 80 мл 2X PBS. Добавьте 8 мл 50% (об. / Об.) Глутарового альдегида и 52 мл dd воды. Сделать свежим перед использованием. Для фиксации насекомых и рыб с помощью погружения в микроволновую печь используйте 2% об. / Об. Глутарового альдегида и 2% параформальдегида в O.1M какодилатный буфер pH 7,4. Смешайте 4 мл 8% об. / Об. Глутаральдегида с 2 мл 16% мас. / Об. Параформальдегида в 8 мл 0,2 М какодилатного буфера. Добавьте 2 мл дд воды, чтобы довести конечный объем до 16 мл. Сделайте свежий прямо перед использованием.

Тетроксид осмия 2% мас. / Об. В 0,1 М какодилатном буфере. Используйте крекер для ампул, чтобы открыть флаконы с фиксатором. Добавьте равные количества 4% (вес. / Об.) Водного четырехокиси осмия и 0,2 М какодилатного буфера с pH 7,4 в сцинтилляционный флакон на 20 мл. Этот фиксатор можно использовать 1 или 2 дня.Отменить, если раствор выглядит черноватым (окисленным). Хранить при температуре 4 ° C во вторичной стеклянной банке.

Забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) 2X (0,02M pH 7,4) смешайте 1 пакетик порошка с 500 мл dd воды. Может храниться несколько недель при 4 ° C. Если в бутылке появился мусор, выбросьте его.

Тиокарбогидразид (TCH) 1% водный раствор мас. / Об. Нагрейте 25 мл воды на горячей плите до 58 ° C. Добавить 0,25 г тиокарбогидразида в нагретую воду при перемешивании до растворения порошка, можно оставить на 2–3 часа, цвет потемнеет.Уменьшите огонь, помешивая. Снимите с плиты и дайте остыть до комнатной температуры (25 ° C). Фильтр с помощью шприцевого фильтра 0,45 мкм. Хранить при комнатной температуре во избежание выпадения осадков до 1 недели.

Феррицианид калия 3% мас. / Об. Добавьте 1,5 г порошка к 50 мл 0,2 М буферного раствора какодилата натрия, pH 7,4. Встряхните до полного растворения. Ярко-желтый раствор. Хранить при 4 ° C в течение нескольких месяцев.

Имидазол Добавьте 0,7 г к 50 мл натрийакодилатного буфера с pH 7.4 и перемешайте до полного растворения. Довести pH до 7,4. Хранить при 4 ° в течение нескольких недель. ▲ ОСНОВНОЙ ШАГ После добавления имидазола убедитесь, что pH буферного раствора равен 7,4, иначе он выпадет в осадок при добавлении четырехокиси осмия.

Осмий / имидазол (Osmid ) Добавьте равные количества 4% -ного водного раствора четырехокиси осмия и раствора имидазола / какодилата. ▲ ВАЖНЫЙ ШАГ. Необходимо отрегулировать pH раствора осмия / имидазола, иначе осмий выпадет в осадок из раствора. Используйте pH-бумагу и добавьте 1 н. Гидроксид натрия, чтобы поднять pH до ~ 7.4. Янтарный цвет нормальный. Не используйте, если присутствует осадок. Сделайте свежий прямо перед использованием для всех этапов осмия.

Фиксатор с восстановленным осмием (RO) Откройте флакон с фиксатором, используя устройство для взлома ампул. Добавьте равные количества 4% (вес. / Об.) Водного четырехокиси осмия к 3% феррицианиду калия в 0,2 М какодилатном буфере. Хранить в двойной банке в холодильнике при 4 ° C в течение 1-2 дней.

Цитрат свинца сульфата меди

En Bloc Stain

Сначала составьте четыре компонента следующим образом.Для 1M нитрата свинца растворите 3,31 г в 10 мл двухвалентной воды на мешалке до полного растворения. Для 0,4 М сульфата меди растворяют 0,64 г в 10 мл двухвалентной воды на мешалке до полного растворения. Для 1M гидроксид натрия растворите 4 г гранул гидроксида натрия в 40 мл dd воды. Для 0,2 ​​M тринатрийцитрат смешайте 0,6 г в 10 мл dd воды на мешалке до растворения.

Затем начните с небольшого стакана, содержащего 1,75 мл дд воды и 3,25 мл цитрата натрия при постоянном перемешивании.Добавьте 0,5 мл 1 М нитрата свинца и 0,125 мл сульфата меди, а затем 1 мл 1 М гидроксида натрия (без карбоната), пока синий раствор не станет прозрачным. В синем растворе не должно образовываться осадка, и его следует использовать немедленно. Отжимайте 12 578 г в течение 5 минут. Затем перед использованием отфильтруйте с помощью шприцевого фильтра 20 мкм. Делайте каждый раз свежим из стоковых растворов. Храните исходные растворы при 4 ° C в течение нескольких недель.

Свинец аспартат

En Bloc Stain

Получите исходную аспарагиновую кислоту путем растворения 0,998 г L-аспарагиновой кислоты (Sigma Cat.№ A4534) в 250 мл dd воды. Лучше растворяется при pH 3,8. Хранить до 1 месяца. Чтобы сделать пятно от тяжелых металлов, растворите 0,066 г нитрата свинца в 10 мл раствора аспарагиновой кислоты; довести pH до 5,5 с помощью 1M КОН. Перед использованием нагрейте раствор до 60 ° C, чтобы обеспечить устойчивость пятен. Используйте только свежеприготовленный красящий раствор.

Embed 812 Resin (твердый состав)

Смешайте 19 мл эпоксидной смолы с 12,5 мл DDSA и 10 мл NMA в трехстороннем стакане на небольшой мешалке в вытяжном шкафу.Перемешивайте компоненты вместе в течение 1 часа. Добавьте 0,7 мл BDMA под поверхность и продолжайте перемешивать еще 15–30 минут. Храните неиспользованные порции в пробирках на 15 мл в морозильной камере при -25 ° C для инфильтрации. Для окончательной заливки используйте только свежеприготовленные смеси.

Процедура

Фиксация

• 1 |

  Выберите вариант A для Drosophila и рыбок данио, если доступна микроволновая печь, выберите вариант B, если микроволновая печь недоступна, и вариант C, если выполняется перфузионная фиксация.Фиксация в микроволновой печи экономит время и дает хорошо закрепленный материал с очень хорошей ультраструктурой.

  ! ВНИМАНИЕ! Все эксперименты на животных должны соответствовать надлежащим правилам.

A. Микроволновая фиксация мозга

Drosophila , нервно-мышечных соединений (NMJ) и рыбок данио: ВРЕМЯ 1,5 ч

1. Включите микроволновую печь и установите температуру охладителя на 13 ° C. Если вы используете Coldspot, убедитесь, что он заполнен водой и на нем нет больших пузырей.Добавьте фиксатор в многолуночный планшет Coors, помещенный в пластиковую или стеклянную чашку Петри диаметром 150 мм. ! ВНИМАНИЕ! Токсичные работы под вытяжным шкафом, надевайте перчатки.

2. Для Drosophila анестезируйте взрослых мух углекислым газом. Соберите взрослых мух с помощью кисти. Для мозгов отрежьте головку и сразу же добавьте в фиксирующий раствор в чашке Coors или многолуночном планшете и поставьте в микроволновую печь. Для приготовления НМС добавьте фиксатор к разрезанному филе личинки, закрепленному на чашке.Когда ткань затвердеет, удалите булавки и добавьте в многолуночный планшет или блюдо Coors с помощью маленькой кисточки.

   Для рыбок данио: добавьте несколько капель раствора трикана в чашку Петри и подождите, пока рыба не перестанет плавать. Удалите воду и быстро добавьте фиксирующий раствор. Немедленно поместите в микроволновую камеру. ▲ ВАЖНЫЙ ШАГ Быстро погрузите салфетку в микроволновую печь и включите питание.

3. Исправить на уровне мощности 1 (100 Вт) в течение 1 минуты включения-1 минуты выключения-1 минуты включения.

4. Установите переключатель в положение 3 уровня мощности (300 Вт) и зафиксируйте на 20 секунд вкл. — 20 секунд выкл. — 20 секунд вкл.Сделайте это трижды. ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Между импульсами осторожно встряхивайте блюдо и перемещайте его на новое место в микроволновой печи, чтобы избежать нагрева.

5. Достаньте из микроволновой печи и оставьте на 30 мин-1 час при комнатной температуре под вытяжным шкафом.

6. Удалить фиксатор и промыть 3 раза в 0,1 М какодилатном буфере, pH 7,4.

7. При использовании мухи обрежьте филе мухи так, чтобы область с мышечными волокнами и синаптическими бутонами была заблокирована.

B) Стендовая фиксация головного мозга

Drosophila , СМП и рыбок данио: ВРЕМЯ 1.5–2 ч.

1. Анестезируйте рыбу и мух, как указано выше (вариант A, шаг ii).

2. Добавьте фиксатор в посуду и оставьте на 1 час под вытяжным шкафом при комнатной температуре.

3. Промыть 2–3 раза по 5 мин в 0,1 М какодилатном буфере, pH 7,4.

4. Обрежьте филе мухи так, чтобы область с мышцами и синаптическими бутонами была заблокирована.

C) Перфузионная фиксация и вибрация мозга мыши: ВРЕМЯ 4–12 ч

1. Анестезируйте взрослых мышей с помощью пентобарбитала натрия (нембутал, 60 мг / кг), вводимого внутрибрюшинно.

   ! ВНИМАНИЕ! Все эксперименты на животных должны соответствовать надлежащим правилам.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Сердце животного должно биться. Если животное получило передозировку пентобарбитала, начните сначала.

2. Ножницами разрезать живот, с помощью иглы 27-го размера проколоть правое предсердие и ввести канюлю в левый желудочек. ! ВНИМАНИЕ! Установите перфузионный аппарат под вытяжной шкаф и работайте там. Носить перчатки.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Весь процесс от открытия грудной клетки до начала перфузии должен быть выполнен менее чем за 100 секунд.

3. Начните перфузию и продолжайте фиксацию, пока хвост не станет жестким. Перфузируйте ~ 200 мл раствора (~ скорость потока 10 мл / мин). Удалите мозг из черепа и погрузите в свежий фиксатор на 4 часа при комнатной температуре или оставьте мозг на ночь в фиксаторе при температуре 4 ° C.

   ? УСТРАНЕНИЕ НЕПОЛАДОК

4. Через 4 часа или на следующий день промойте 3 раза в буфере какодилата натрия 0,1 М, pH 7,4.

5. Измените мозг на 0,1 М фосфатный буфер для срезов с помощью вибратома.

6. Разрежьте мозг на полусферы, используя лезвие бритвы и суперклей, плоскую поверхность полусферы, чтобы зажать и прикрепить к вибратому для разделения.

7. Вырежьте срезы размером 100–200 мкм и соберите с помощью кисти.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Обращайтесь с тканью осторожно, чтобы избежать механических повреждений. Для лучшего проникновения пятен держите срезы толщиной менее 200 мкм.

8. Обрежьте срезы, используя лезвие бритвы, до меньшей области мозга, включая бочкообразную кору или интересующую область.

9. Перенести в стеклянные флаконы и хранить в буфере до стадии осмия. ТОЧКА ПАУЗЫ Ткань можно хранить в буфере при 4 ° C в течение ночи, но для достижения наилучших результатов лучше продолжить обработку в фиксаторе осмия.

Осмиевая пропитка

A. Метод микроволновой пропитки: ВРЕМЯ 4 ч

1. Для Drosophila добавьте фиксатор осмия в углубленные слайды. Для рыбок данио перенесите рыбу из 35-миллиметровых чашек Петри в маленькие стеклянные пузырьки после промывки буфером с помощью небольшой кисти.Для срезов мозга используйте маленькие стеклянные флаконы. ! ВНИМАНИЕ! Токсично, избегать вдыхания, носить перчатки. Работайте в вытяжном шкафу.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Будьте осторожны, чтобы не засосать маленькие образцы в пипетку при смене растворов. Используйте пластиковые пипетки с тонкими наконечниками. Работайте быстро и не допускайте высыхания ткани.

2. Поместите образцы в микроволновую печь. Пост-фиксация на уровне мощности 1 (100 Вт) в течение 1 минуты включения-1 минуты выключения-1 минуты включения.

3. Установите переключатель в положение уровня мощности 3 (300 Вт) и зафиксируйте на 20 секунд вкл. — 20 секунд выкл. — 20 секунд вкл.Сделайте это трижды.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Между импульсами осторожно встряхните посуду или флаконы и переместите их на новое место в микроволновой печи, чтобы избежать нагрева.

4. Выньте образцы из микроволновой печи и оставьте их под вытяжным шкафом на 1-2 часа при комнатной температуре.

   !! ВНИМАНИЕ! Храните образцы закрытыми при переносе в вытяжной шкаф из микроволновой печи. В вытяжном шкафу накрываться. Осмий летуч, избегайте вдыхания.

   Обратите внимание, что возможно более длительное время инкубации осмия, но помните, что ткань становится более хрупкой и нежной, а детали ткани могут стать мутными.Попробуйте разные моменты времени.

5. Удалите раствор осмия и хорошо промойте дистиллированной водой, пока промывочная вода не станет прозрачной при комнатной температуре, промойте 3-5 раз по 5 минут каждый.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Важно очень хорошо промыть в дистиллированной воде, пока промывочная вода не станет чистой!

6. Добавьте свежеотфильтрованный TCH в ткань. Оставьте на 2 минуты, затем поставьте в микроволновую печь на уровень мощности 2 (200 Вт) на 3 минуты.

7. Удалите раствор TCH и промойте 3–5 раз по 5 мин каждый дистиллированной водой при комнатной температуре.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Очень важно промыть ткань, чтобы избежать окрашивания фона перед добавлением второго этапа осмия.

8. Добавьте свежеприготовленный раствор фиксатора осмия и повторите шаг ii, как указано выше. На этом этапе вы можете использовать тот же забуференный осмий (Osmid или ROTO) или обычный забуференный какодилатом осмий. После обработки в микроволновой печи на уровне мощности 1 в течение 1 мин. — 1 мин. Выключ. — 1 мин., Дайте ткани постоять при комнатной температуре в течение 30 минут.

9. При комнатной температуре промойте 3–5 раз в течение 5 минут в dd воде.

B. Фиксация стола Осмиевая пропитка Вариант: ВРЕМЯ 5–6 часов

1. При комнатной температуре поместите образцы в осмиевый фиксатор на 2 часа в вытяжном шкафу (используйте более короткое время, если есть фон).

2. Хорошо промойте в дистиллированной воде 3–5 раз по 5 минут.

3. Добавьте к образцам свежеотфильтрованный THC и оставьте при комнатной температуре на 30 минут в вытяжном шкафу.

4. Хорошо промойте в дистиллированной воде 3–5 раз по 5 минут.

5. Добавьте свежеприготовленный осмиевый фиксатор на 1 час при комнатной температуре в вытяжном шкафу.

6. Хорошо промойте в дистиллированной воде 3–5 раз по 5 минут.

En Bloc окрашивание

• 3

  Следуйте варианту А для окрашивания ядра, органелл и постсинаптической плотности синапса. Следуйте варианту B, чтобы получить высококонтрастные мембраны клеток и органелл, выделить микротрубочки и обеспечить электронно-прозрачную цитоплазму и ядро.

A. Вариант: уранилацетат и свинцовый аспартат

en bloc окрашивание: ВРЕМЯ 4–5 ч

1. Инкубируйте образцы в течение 2 часов при комнатной температуре (25 ° C), используя 2% водный раствор UA.

2. Несколько раз промыть водой; минимум 3 раза по 5 минут каждый.

3. Инкубируйте образец со свежеприготовленным аспартатом свинца в течение 1 часа при 60 ° C.

4. Промыть водой 3 раза по 15 минут каждый.

Б.Опция: сульфат меди цитрат свинца

en bloc окрашивание: ВРЕМЯ 2–12 часов

1. Перенесите ткань в свежие флаконы с водой. Смешайте окрашивающий раствор сульфата меди / цитрата свинца из исходных растворов непосредственно перед использованием и добавьте во флаконы.

2. Окрашивание в растворе сульфата меди / цитрата свинца при 37 ° C в течение 2 часов или в течение ночи при 25 ° C.

   ТОЧКА ПАУЗЫ Образцы можно окрашивать в течение ночи в растворе цитрата сульфата меди и свинца.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Не помещайте образцы в холодильник, так как это может вызвать осаждение свинца. !

3. Хорошо промойте дистиллированной водой перед обезвоживанием спирта 3 раза по 5 минут.

Дегидратация

A. Опция: комбинированная микроволновая / настольная опция ВРЕМЯ 1 ч

При использовании мухи, с помощью щетки или пипетки с тонким наконечником, осторожно перенесите мухоловки в маленькие пузырьки, содержащие дистиллированную воду или 50% этанол. Срезы рыбы и мозга оставляют в стеклянных флаконах, используемых для фиксации, если старые не кажутся загрязненными предыдущими растворами, затем переносят образцы в свежие, содержащие раствор dd воды или 50% этанола, с помощью тонкой кисти.

▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Работайте быстро и не допускайте высыхания тканей.Оставьте небольшое количество этанола во флаконе и не оставляйте ткани открытыми. ! ВНИМАНИЕ! Ткань — хрупкая, обращайтесь с ней осторожно!

1. Поместите флаконы в пену и поставьте в микроволновую печь. Убедитесь, что они соприкасаются с холодным пятном.

2. Обезвоживание ткани в восходящей серии этанола 50%, 70%, 95% об. / Об. В течение 20 секунд во включенном состоянии — 20 секунд в выключенном состоянии — 20 секунд на уровне мощности 2 (200 Вт).

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Убедитесь, что флакон заполнен менее чем на 1/3.Большие объемы растворов вызывают нагревание в микроволновке.

   ! ВНИМАНИЕ! Надевайте перчатки, работайте в вытяжном шкафу.

3. 3 раза обезвоживайте в 100% об. Этаноле на уровне мощности 2 в течение 45 секунд.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Убедитесь, что флакон со 100% -ным этанолом используется только для ЭМ-исследований и был открыт в течение последних 3 месяцев. Плотно закрывайте пленкой Parafilm ©.

4. Дальнейшее обезвоживание ткани оксидом пропилена (PPO).Добавьте небольшое количество во флаконы и оставьте на 10 минут под вытяжным шкафом. Повторите для 2 изменений в PPO.

   ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Используйте свежеоткрытый флакон с оксидом пропилена (PPO) и добавьте во флакон. Работайте быстро, так как PPO может вытечь из дозатора. Всегда закрывайте бутылки PPO, когда они не используются. ! ВНИМАНИЕ! Токсично, используйте нитриловые перчатки и работайте в вытяжном шкафу.

B. Вариант обезвоживания на стенде: ВРЕМЯ 1,5–2 часа

1. При комнатной температуре инкубируйте в течение 5–10 минут в каждой серии восходящего спирта, как в шаге iii и iv выше.Следуйте шагу v, как указано выше.

Инфильтрация и заделка: ВРЕМЯ 4 дня

• 5

  Приготовьте раствор смолы, пока ткань обезвоживается. Используйте стаканы с тройным наливом и работайте под вытяжным шкафом с мешалкой.

  ! ВНИМАНИЕ! Эпоксидная смола и оксид пропилена токсичны, используйте перчатки, работайте в вытяжном шкафу.

• 6

  Смешайте 100% мас. / Об. Смолу Embed 812 50:50 со 100% (об. / Об.) Оксидом пропилена (PPO) и добавьте во флакон.Приблизительные измерения глазного яблока — это нормально.

  Оставить на шейкере или ротаторе на ночь при комнатной температуре.

• 7

  На следующий день замените образцы на смесь, содержащую 75:25 об. / Об. Добавьте смола 812: PPO и оставьте на ночь.

  Оставить на ночь на шейкере или ротаторе при комнатной температуре.

• 8

  На следующий день замените образцы на 100% мас. / Об. Смолу Embed 812. Оставьте на 4–6 часов в 100% смоле.

  ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Залить свежеприготовленный твердый состав смолы Embed 812 с помощью кисти для удаления ткани из флакона.

• 9

  Для рыбы, СМП и головы мух: добавьте бумажную этикетку в форму для гроба, затем свежую смолу и, наконец, салфетку. Убедитесь, что в смоле нет пузырей. Сориентируйте образец к концу формы с помощью кисти. Для ломтика мозга используйте капсулы Beem с плоским дном, завернутые внутрь бумажные этикетки. Осторожно прижмите кусочек к дну капсулы с помощью кисти.

• 10

  Отвердите в течение 2 дней в печи для заливки, установленной на 60 ° C.

  ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Дайте блокам затвердеть в течение 2 дней для оптимальной твердости блоков.

Подготовка покровных стекол для срезов ВРЕМЯ 2 дня

• 11

  Желатиновые покровные стекла с раствором субблоков.

• 12

  Дайте высохнуть на воздухе в непыльной среде в течение ночи.

  Убедитесь, что на предметные стекла не прилипли частицы пыли, в таком случае сдуйте их с помощью баллончика Dust-Off ©.

• 14

  Установите испаритель Cressington так, чтобы в держателе было до 16 покровных стекол, примерно в 6 дюймах над источником углерода, чтобы избежать падения на них мусора.

• 15

  Поместите двухконечные стержни из высококачественного графитированного угля в держатели пружин так, чтобы они соприкасались.

• 16

  Откачка до 10 ⁻⁷ мбар. Штоки для отвода газа с установленной защитной пластиной.

• 17

  Углеродное покрытие с толщиной слоя 7–10 нм, измеренной с помощью кварцевого монитора толщины. Покровные стекла должны выглядеть темно-серыми. Если вы хотите тлеющий разряд, выполните шаги 18–19. (Примечание: тлеющий разряд может сделать покровные стекла менее гидрофобными, но это не обязательно)

• 18

  Нажмите кнопку утечки и вставьте пластину тлеющего разряда.

• 19

  Наблюдайте за пурпурным свечением и разрядом в течение 5 минут.

• 20

  Удалите воздух из аппарата и осторожно удалите покровные стекла.

• 21

  Напишите слово «вверх» на поверхности с покрытием. Храните в пластиковых держателях предметных стекол до тех пор, пока не понадобится

Подготовка тонких срезов ВРЕМЯ 1–2 часа

• 22

  Удалите блоки из форм или капсул Beem с помощью лезвия бритвы или пресса для капсул Beem.

• 23

  Удалите излишки смолы с помощью триммера Leica EM и аккуратно обрежьте блок лицевой стороной вниз, пока не попадете в ткань. Вы должны увидеть в блоке черную ткань. ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Подойдите к блоку медленно и будьте осторожны, чтобы не удалить слишком много смолы слишком быстро, так как это может повредить образец.

• 24

  Сформируйте трапецию с чистыми краями с помощью бритвенного лезвия или инструмента для обрезки кромок.

• 25

  Используйте нож Diatome Histo (6 мм), чтобы разрезать срезы размером 1 мкм, чтобы разрезать всю поверхность блока.Подбирайте участки с металлической петлей, добавляя к капле воды на горке.

• 26

  Установите конфорку на настройку 2 и высушите в течение 1 минуты. При необходимости окрасьте толуидиновым синим в течение 20 секунд и промойте дистиллированной водой. Дайте секции высохнуть.

• 27

  Изучите структуру в световом микроскопе при 100-кратном увеличении масляного объектива, чтобы оценить структуру.

• 28

  Обрежьте блок свежим бритвенным лезвием или алмазным режущим инструментом, чтобы получилась трапеция.

  ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Убедитесь, что верх и низ блока параллельны, а стороны имеют равные углы. Форма короткого и широкого блока лучше всего подходит для последовательного разрезания.

• 29

  Используя небольшую кисть, нанесите клей на верх и низ краев блока. Для покровных стекол с углеродным покрытием замените алмазный нож на Jumbo Histo.

  ? УСТРАНЕНИЕ НЕИСПРАВНОСТЕЙ Если секции не слипаются или лента изгибается, удалите блок и добавьте больше клея или заново обрежьте, чтобы трапеция была ровной.

• 30

  После разрезания нескольких тестовых срезов поместите покровное стекло в лодку, наполненную водой, и отрегулируйте уровень воды с помощью шприца или пипетки. Удалите тестовые секции с помощью инструмента для ресниц.

• 31

  Поместите небольшой металлический стержень у кромки воды, чтобы удерживать покровное стекло и удерживать воду у края покровного стекла. Используйте инструмент для ресниц и шприц, чтобы оптимизировать уровень воды и подвести воду к краю планки.

• 32

  Отрежьте тонкую ленту 50–70 нм и снимите покровные стекла с углеродным покрытием, используя инструмент для наращивания ресниц, чтобы манипулировать лентой.Отсоедините ленту от края ножа на задней стороне ножа и осторожно переместите ее, чтобы она прикрепилась к металлической планке.

• 33

  Поднимите покровное стекло медленно и осторожно, чтобы лента прилипла к стеклу по мере того, как вода уходит.

• 34

  Дайте высохнуть на воздухе в течение от 20 минут до ночи в непыльной среде. При необходимости поместите на подогреватель предметных стекол, установленный на 50 ° C, и дайте ему высохнуть.

• 35

  Хранить в вакуумном контейнере или колпаке под вакуумом.Перед визуализацией хорошо высушите.

Визуализация тонких срезов ВРЕМЯ 2 часа — несколько дней

• 36

  Для визуализации FESEM прикрепите покровные стекла к держателю образца с помощью 3 кусков медной ленты.

  ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Эти и следующие условия относятся к Zeiss Sigma и могут отличаться для другого прибора.

  • ii

    Включите HV и установите значение 7–10 кВ для достижения наилучшего контраста образца и предотвращения его повреждения и зарядки в режиме обратного рассеяния.Лучше всего использовать диафрагму 60 мкм. Для этих условий ток накала составляет 2,38–2,469 А, а ток датчика составляет 200 нА. ▲ КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ Эти две точки сильно зависят от условий микроскопа (кВ, ток), детектора (твердотельный или сцинтилляционный) и используемых параметров.

  • iii

    Стигмат на сетке образца для испытаний золото / углерод.

  • iv

    Установите элементы управления детектора обратного рассеяния (BSD) в инвертированное положение и установите усиление на высокое или очень высокое.

  • v

    Установите яркость и контраст для получения оптимального контраста изображения. Начните с малого увеличения (85X), чтобы найти ленту.

  • vi

    Установите разрешение хранилища изображений на 2048 x 1536 пикселей без усреднения кадров или линий.

  • vii

    Запишите изображение, используя медленную скорость сканирования и время задержки 1 мкс / пиксель. Размер пикселя составляет от 3 до 100 нм на пиксель в зависимости от увеличения.

? УСТРАНЕНИЕ НЕПОЛАДОК

См. Руководство по устранению неполадок.

Ожидаемые результаты

Оценка хорошо подготовленного материала состоит из нескольких этапов. При обрезке блока для первоначального разреза должна быть очевидна твердость и инфильтрация внедренной ткани. Если для обрезки вы используете лезвие бритвы, смола должна быть твердой и легко обрезаться, а не резиновым. При обрезке блока с помощью триммера Leica EM заделанная ткань должна выглядеть блестящей после плавного прохода с помощью инструмента для обрезки, а на поверхности образца не должно быть больших сколов.

Полутонкие срезы должны иметь темно-коричневый цвет в результате пропитки осмием, так как структура должна быть видна LM даже без окрашивания толуидиновым синим. Крупные морфологические аберрации, такие как пустоты и белые дыры, указывают на плохую подготовку ткани — возможно, фиксацию, обезвоживание или инфильтрацию. Например, если куски выпадают из секции или блока или лицевая сторона блока выглядит потрескавшейся или потрескавшейся, это указывает на плохую инфильтрацию. Хотя невозможно полностью оценить качество фиксации на уровне LM, можно распознать плохо обработанный материал.Не стоит больше тратить время на плохо обработанные образцы. Лучшие образцы имеют отличный контраст на уровнях LM и EM, остро выглядящие мембраны и общую целостность структуры. См. Дополнительный Рисунок 3 для сравнения методов окрашивания en bloc для более подробной информации.

Тонкие срезы должны хорошо резать и иметь хороший контраст как на FESEM, так и на TEM без какого-либо окрашивания срезов. Контрастность будет уменьшена в SEM по сравнению с TEM, но кВ 7-8, рабочее расстояние 6-9 мм, настройки контрастности и яркости в диапазоне 50-70 и медленная скорость сканирования 8-10 с с временем задержки 1 мкс./ pixel должен обеспечивать хорошее изображение без каких-либо повреждений образца. Эти условия хорошо работают в нашей системе визуализации, но могут отличаться для разных инструментов и детекторов.

После сбора срезов на покровных стеклах важно дать образцу высохнуть на воздухе или на более теплом предметном стекле, чем в вакуумном эксикаторе, поскольку влажные образцы вызовут «пузырение» срезов в FESEM и загрязнение отверстий.

Коробка 1

Устранение неполадок

916

1685

Шаг	Проблема	Возможная причина	Решение
1C		Перфузия мозга у другого животного	Плохая перфузия
	Мозг кажется окровавленным		Отбросить, попробуйте другое животное
	Печень не розовеет		Откажитесь, попробуйте другое животное
	нос или рот животного	Откажитесь, попробуйте другое животное	Используйте идеальное перфузионное давление (~ 150 мм рт.	Используйте только самые здоровые ткани для экспериментов, если плохая перфузия или больные животные, отказаться.Используйте только свежие фиксаторы.
		Недостаточная промывка между осмизацией и обработкой TCH	Хорошо промойте до и после этапов осмия и TCH.
23, 25	Сколы блока или выпадение ткани из секции	Неадекватная инфильтрация	Обязательно проникайте на ротатор на ночь в течение 2 ночей
		Слишком быстрое использование лезвия триммера EM1686	Подходите	слишком быстро блокировка медленно
	Центральная часть блока мягкая	Неадекватная инфильтрация	Более длительная инфильтрация, используйте только свежеприготовленные смолы для инфильтрации и заливки
28.32	Изгибы ленты	Верх и низ лицевой стороны блока не параллельны, неровные стороны	Подрежьте блок свежим бритвенным лезвием или алмазным инструментом для обрезки
29	Лента не слипается	Недостаточно клея сверху	Добавьте клея сверху и снизу поверхности блока
44	Зарядка образца в SEM	Недостаточно углеродного покрытия или медной ленты на покровных стеклах	Удалите образец и попробуйте еще ленту или углерод покрыть поверхность
	Повреждение луча, разрывы в секции	Луч слишком яркий	Попробуйте использовать более низкое напряжение, уменьшите кВ и яркость
	Пузыри на секциях, образование черных пятен	Секции слишком много влажность	Дайте секциям высохнуть на воздухе, затем храните под вакуумом в течение 24 часов

Благодарности

Мы благодарим следующие фонды, компании и поддерживающее финансирование этой работы: Gatsby Charitable Trust, John S. McDonnell Foundation, McKnight Foundation, The Mathers Foundation, Center for Brain Science, Гарвард, Initiative for Innovative Computing, Microsoft Research, Carl Zeiss SMT, JEOL и FIBICS.

Мы ценим полезные обсуждения с Уинфредом Денком, Джоном Хойзером, Томом Ризом и Моррисом Дж. Карновски. Мы благодарим Нафису Гори и Эрику Хартвиг ​​за техническую поддержку, Кристину Мичеву и Джорджан О’Брайен за комментарии к рукописи, Кристель Генуд и Джоэля Манкузо из Гатана за визуализацию образцов рыбок данио с помощью SBF-SEM и Рика Гиберсона из Ted Pella Inc. за советы в микроволновых условиях.

Сноски

Авторы этой рукописи заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Вклад авторов

JB разработал концепцию окрашивания, подготовил образцы рыб и дрозофилы, и подготовил рукопись.

JCT, NK и RS получили изображения срезов Drosophila .

RS помогла с секциями, визуализацией и общей оценкой качества блока.

KH, RS, JCT и NK улучшили ультратонкие срезы и сбор.

KH разработал метод сбора ультратонких срезов на ленту и построил используемые устройства ATUM.

JWL помог мотивировать усилия по поиску лучших протоколов окрашивания en bloc , наблюдал за всеми экспериментами по визуализации, которые проводились в его лаборатории, и помогал интерпретировать данные изображения.

SJS помог мотивировать усилия по улучшению окрашивания en bloc , а также курировал и помогал в экспериментах по визуализации, проводимых в Стэнфорде.

Ссылки

1. Гей Х., Андерсон Т.Ф. Серийные срезы для электронной микроскопии. Наука. 1954; 120: 1071–3. [PubMed] [Google Scholar] 2.Стивенс Дж. К., Дэвис Т. Л., Фридман Н., Стерлинг П. Системный подход к реконструкции микросхем с помощью электронной микроскопии серийных срезов. Brain Res. 1980; 3: 265–93. [PubMed] [Google Scholar] 3. Удар Н. По проводам. Нат методы. 2007; 4: 975–981. [Google Scholar] 4. Денк В., Хорстманн Х. Серийная сканирующая электронная микроскопия лица для реконструкции трехмерной тканевой наноструктуры. PLoS Biol. 2004; 2: e329. DOI: 10.1371 / journal.pbio.0020329. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5.Knott G, Marchman H, Wall D, Lich B. Серийная сканирующая электронная микроскопия ткани мозга взрослых с использованием фрезерования сфокусированным ионным пучком. J Neurosci. 2008. 28: 2959–2964. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Мичева К., Смит С.Дж. Матричная томография: новый инструмент для визуализации молекулярной архитектуры нейронных цепей. Нейрон. 2007; 55: 25–36. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7. Хейворт К.Дж., Кастури Н., Шалек Р., Лихтман Дж. В.. Микроскопия и микроанализ. Vol. 12. Издательство Кембриджского университета; 2006 г.Автоматизация сбора ультратонких серийных срезов для реконструкций ТЭМ большого объема; С. 86–87. [Google Scholar] 8. Хоффпауир Б.К., Папа Б.А., Спиру Г.А. Последовательные срезы и электронная микроскопия больших объемов тканей для трехмерного анализа и реконструкции: на примере чашечки Хельда. Nat Protoc. 2007; 2: 9–22. [PubMed] [Google Scholar] 11. Hayat MA. Принципы и методы биологической электронной микроскопии. 3. Издательство Кембриджского университета; Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США: 1989. [Google Scholar] 12. Селигман AM, Wasserkrug HL, Hanker JS.Новый метод окрашивания (OTO) для усиления контраста липидсодержащих мембран и капель в ткани, фиксированной тетроксидом осмия, с помощью осмиофильного тиокарбогидразида (TCH) J Cell Biol. 1966. 30: 424–432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Келли Р.О., Деккер РАФ, Bluemink JG. Связывание осмия, опосредованное лигандом: его применение в покрытии биологических образцов для сканирующей электронной микроскопии. J Ultrastruc Res. 1973; 45: 254–258. [PubMed] [Google Scholar] 14. Шоттон Д.М., Хойзер Дж. Э., Риз Б. Ф., Риз Т. С..Постсинаптические мембранные складки нервно-мышечного соединения лягушки визуализированы с помощью сканирующей электронной микроскопии. Neurosci. 1979; 4: 427–35. [PubMed] [Google Scholar] 15. Фридман П.Л., Эллисман М.Х. улучшенная визуализация периферических нервов и сенсорных рецепторов в сканирующем электронном микроскопе с использованием криодеструкции и импрегнации осмий-тиокарбогидразид-осмий. J Neurocytol. 1981; 10: 111–131. [PubMed] [Google Scholar] 16. Макдональд К. Феррицианид осмия улучшает сохранность микрофиламентов и визуализацию мембран в различных типах клеток животных.J Ultrastruc Res. 1984; 84: 107–118. [PubMed] [Google Scholar] 17. Уиллингем М.С., Резерфорд А.В. Использование осмий-тиокарбогидразид-осмия (OTO) и ферроцианид-восстановленного осмия для повышения контрастности и сохранения мембран в культивируемых клетках. J Histochem Cytochem. 1984. 32: 455–460. [PubMed] [Google Scholar] 18. White DL, Mazurkiewicz JE, Barnett RJ. Химический механизм окрашивания тканей смесями четырехокиси осмия и ферроцианида. J Histochem Cytochem. 1979; 27: 1084–91. [PubMed] [Google Scholar] 19.Ангермюллер С, Фахими HD. Тетроксид осмия, забуференный имидазолом: превосходный краситель для визуализации липидов в просвечивающей электронной микроскопии. Histochem J. 1982; 14: 823–35. [PubMed] [Google Scholar] 20. Тьери Дж., Бернье Дж., Бержерон М.Дж. Простая методика окрашивания клеточных мембран имидазолом и тетроксидом осмия. Histochem Cytochem. 1995; 43: 1079–84. [PubMed] [Google Scholar] 21. Харрис К.М., Стивенс Дж. Дендритные шипы пирамидных клеток CA1 в гиппокампе крыс: серийная электронная микроскопия со ссылкой на их биофизические характеристики.J Neurosci. 1989; 9: 2982–2997. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 22. Nusser Z, Cull-Candy S, Farrant M. Различия в количестве синаптических рецепторов GABA (A) лежат в основе вариаций мини-амплитуды GABA. Нейрон. 1997; 3: 697–709. [PubMed] [Google Scholar] 23. Sätzler K, Söhl LF, Bollmann JH, Borst JG, Frotscher M, Sakmann B, Lübke JH. Трехмерная реконструкция чашечки Held и ее постсинаптического главного нейрона в медиальном ядре трапециевидного тела. J Neurosci. 2002; 22: 10567–79. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 24.Ganeshina O, Berry RW, Petralia RS, Nicholson DA, Geinisman Y. Различия в экспрессии AMPA и NMDA рецепторов между аксоспинными перфорированными и неперфорированными синапсами связаны с конфигурацией и размером постсинаптических плотностей. J Comp Neurol. 2004; 468: 86–95. [PubMed] [Google Scholar] 25. Попов В.И., Стюарт М.Г. Сложность контактов между синаптическими бутонами и дендритными шипами в гиппокампе взрослых крыс: трехмерные реконструкции из серийных ультратонких срезов in vivo. Синапс.2009. 63: 369–377. [PubMed] [Google Scholar] 26. Харрис К.М., Перри Э., Борн Дж., Фейнберг М., Острофф Л., Херлберт Дж. Равномерные последовательные срезы для просвечивающей электронной микроскопии. J Neurosci. 2006; 26: 12101–12103. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27. О’Коннелл М.К., Мурти С., Фан С., Сюй С., Бьюкенен Дж., Спилкер Р., Далман Р.Л., Заринс С.К., Денк В., Тейлор К.А. Трехмерная микро- и наноструктура медиального пластинчатого элемента аорты, измеренная с помощью трехмерной конфокальной и электронной микроскопии. Matrix Biol.2008; 27: 171–81. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Murakami T, Iida N, Taguchi T., Ohtani O, Kikuta A, Ohtsuka, Itoshima T. Проводящее окрашивание биологических образцов для сканирующей электронной микроскопии с особым упором на лиганд-опосредованную импрегнацию осмием. Сканирующая электронная микроскопия. 1983; 1: 235–246. [PubMed] [Google Scholar] 29. West JB, Fu Z, Deerinck TJ, Mackey MR, Obayashi JT, Ellisman MH. Структурно-функциональные исследования кровеносных и воздушных капилляров в легком цыпленка с помощью трехмерной электронной микроскопии.Respir Physiol Neurobiol. 2010; 170: 202–209. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Бриггман К., Хельмштадтер М., Денк В. Специфика проводки в цепи направленной селективности сетчатки. Природа. 2011; 471: 183–188. [PubMed] [Google Scholar] 31. Fiala JC. Reconstruct : бесплатный редактор для серийной секционной микроскопии. J Микроскопия. 2005; 218: 52–61. [PubMed] [Google Scholar] 32. Schnepf E, Hausmann K, Herth W. Метод окрашивания четырехокиси осмия-ферроцианида калия (OsFeCN) для электронной микроскопии: критическая оценка с использованием инфузорий, водорослей, мхов и высших растений.Гистохимия. 1982; 76: 261–271. [PubMed] [Google Scholar] 33. Dykstra J, Reuss LE. Биологическая электронная микроскопия: теория, методы, устранение неисправностей. Kluwer Academic / Plenum Publishers; Нью-Йорк, Нью-Йорк: 2003. С. 179–191. [Google Scholar] 34. Hyatt MA. Пятна и цитохимические методы. Пленум Пресс; Нью-Йорк, Нью-Йорк: 1993. С. 215–230. [Google Scholar] 35. Уолтон Дж. Аспартат свинца, контрастное пятно en bloc , особенно полезное для ультраструктурной энзимологии. J Histochem Cytochem. 1979; 27: 1337–1342.[PubMed] [Google Scholar] 36. Kopriwa BM. Блок-окрашивание тканей тетроксидом осмия, восстановленным ферроцианидом калия, и аспартатом свинца для электронной микроскопической радиоавтографии. J Histochem Cytochem. 1984. 32: 552–54. [PubMed] [Google Scholar] 37. Бьюкенен Дж. Микроволновая обработка тканей Drosophila для электронной микроскопии. Microsc сегодня. 2004; 12: 42. [Google Scholar] 39. Леонг А.С., Даймон М.Э., Милиос Дж. Микроволновое излучение как форма фиксации для световой и электронной микроскопии. J Pathol.1985; 146: 313–21. [PubMed] [Google Scholar] 40. Дженсен Ф. Е., Харрис К. М.. Сохранение ультраструктуры нейронов в срезах гиппокампа с помощью быстрой фиксации с помощью микроволнового излучения. J Neurosci Methods. 1989; 29: 217–230. [PubMed] [Google Scholar] 41. Вебстер П. Обработка и встраивание с помощью СВЧ для просвечивающей электронной микроскопии. Методы Мол Био. 2007; 369: 47–65. [PubMed] [Google Scholar] 42. Войти в систему GR, Dvorak AM. Микроволновая фиксация обеспечивает отличную сохранность тканевых клеток и антигенов для световой и электронной микроскопии.Histochem J. 1988; 20: 373–387. [PubMed] [Google Scholar] 43. Бьюкенен Дж., Мичева К., Смит С.Дж. Микроскопия и микроанализ. Приложение 2. Том. 8. Издательство Кембриджского университета; 2002. Микроволновая обработка и иммуномечение нанозолотом перед внедрением для электронной микроскопии; С. 160–161. [Google Scholar] 44. Леонард Дж. Б., Шепардсон СП. Сравнение режимов нагрева в методах быстрой фиксации для электронной микроскопии. J Histochem Cytochem. 1994; 42: 383–391. [PubMed] [Google Scholar] 45. Бор Х., Бор Дж. Сворачивание и денатурация глобулярных белков с помощью микроволнового излучения.Phys Rev E Stat Phys. Plasmas Fluids связаны с междисциплинарными темами. 2000. 61: 4310–14. [PubMed] [Google Scholar] 46. Тинлинг С.П., Гиберсон Р.Т., Куллар Р.С. Воздействие микроволн увеличивает скорость деминерализации костей независимо от температуры. J Microsc. 2004. 215: 230–35. [PubMed] [Google Scholar] 47. Гиберсон RT. Понимание фиксации с помощью микроволновой печи: энергия против нагрева. Микроскопия и микроанализ. 2003; 9: 158. [Google Scholar] 48. Hayat MA. Пятна и цитохимические методы. Пленум Пресс; Нью-Йорк: 1993.[Google Scholar]

Ампула на Edison E27 40 Вт 220 В Стиль старинный антик Ампула с нитью с переменной интенсивностью Blanc chaud Ampoules incandescentes Luminaires & Eclairage lawawarenesssociety.in

Ампула с нитью Edison E27 40 Woule 220 V Style винтажная Ампула à переменная интенсивность Blanc chaud, ампула à filament à переменная интенсивность Blanc chaud Ampoule à по сравнению с Edison E27 40 W 220 V Style vintage антик, Achetez Ampoule и Edison E27 40 W 220 V Style винтажная античная ампула с нитью и переменной интенсивностью Blanc chaud: ✓ Livraison & retours Возможные бесплатные бесплатные (на условиях), Nous offrons un service premium, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, Achetez en ligne ici, автором tout livré à votre porte, Promotion en ligne, LIVRAISON GRATUITE SUR TOUS NOS PRODUITS! с переменной интенсивностью Blanc chaud Ampoule на Edison E27 40 W 220 V Style vintage Ancient Ampoule à filament lawawarenesssociety.дюйм

Ампула на Edison E27 40 Вт 220 В Стиль старинный антиквариат Ампула с нитью накаливания с переменной интенсивностью Blanc chaud: Luminaires et Eclairage. Achetez Ampoule на Edison E27 40 W 220 V Style vintage антикварная ампула на волокне с переменной интенсивностью Blanc chaud: ✓ Livraison & retours gratuits возможные (в определенных условиях). Caractéristiques des ampoules: ампулы с филаментной винтажной клеткой d’écureuil, репродукция nostalgique, база E27 40 Вт 220 В, переменная энергия и интенсивность. Это ампулы Эдисона с переменной интенсивностью, предлагающие без люминесцентных ламп плюс люминесцентные и другие полезные свойства.。 Уникальный дизайн: вдохновение в стиле ампул Томаса Эдисона, истинное воплощение традиций и адаптация к регулируемым светильникам с прекрасным представлением цветов. L’ampoule est fantastique pour un éclairage atmosphérique, dans un pendentif multi-ampoule. 。 Multifonction: ils s’intègrent dans une culot à vis E27 и conviennent aux lustres, aux подвески, aux appliques murales, l’intérieur ou à l’extérieur. Généralement utilisé pour la maison ou la décoration commerciale.кухня, салон, комната, бар, кафе, ресторан Высокое качество: дизайн в стиле «Томас Эдисон», ткань в материале высшего качества, высокая внешняя отделка, долговечность для использования, стойкость к шокам и т. д. 。 Сервисный клиент и гарантия без риска: si les ampoules sont cassées or endommagées, n’hésitez pas à nous contacter avec les détails de votre command et nous vous rembourserons или vous enverrons les ampoules de remplacement. 。 Описание: 。Тип брюк: E27.。Мощность: 40 Вт. 。Напряжение: 220 В. 。Couleur: blanc chaud. 。Стили: A: BT75 B: G80 C: G95 D: T45 E: BT75 F: G80 G: G95. 。H: T45 I: ST64 K: L80 L: A19 M: T10-130 мм N: T30-185 мм O: C35 P: C35. 。Produit de qualité supérieure. 。Idéal pour les luminaires or pour laisser l’ampoule exée. 。Большое использование в барах, отелях, караоке, ресторанах, кафе, фешенебельных выставках, выставочных салонах и других декоративных элементах для создания расслабляющей атмосферы, шале и украшений и интимных украшений.。При замене idéal pour les ampoules halogènes, ces ampoules font une déclaration dans n’importe quelle pièce. 。Содержание: 。1 * 40 Вт ампулы E27 220 В。。。

Ампула с Edison E27 40 Вт 220 В Стиль старинный антиквариат Ампула с нитью и переменной интенсивностью Blanc chaud

Освещение для салона и салона на яслях Lindby Applique LED Applique Murale Tiara с переменной интенсивностью и Moderne Lampe Murale en Blanc en Plâtre / Terre Cuite и 2 лампами, G9, A +.Lustre en Bambou Fait Main à la Main Forme de nid doiseau en rotin Art Lampe Ronde plafonnier LED télécommande contrôlée Restaurant Chambre Bar Salon etc., Flos Bon Jour Unplugged LED Lampe de table Cuivre Tissu F1037015. Créatif mignon petit carré réveil réveil réveil réveil, iShiné Mini Projecteur Jouet 1Modèles 24 Изображения Histoire Classique Récit Lampe de Poche Projecteur Éducatif Jouet Enfant. Аппликация ПЛЮС Laiton Eno Studio. Филе ампулы в буж для чайных платьев 34 V 3 W для декора ванной комнаты YSSMAO Лот из 14 ампул для замены E10 на основе домашней кухни.100 LED с телефоном 32 прикосновений к саду 10 м. RVB alimentée par USB arbre décoratif multicolore fil argenté décoratif для комнаты Guirlande lumineuse на светодиодах, Ampoule include décoratif + IP44 Lampe solaire LED Nain de lanampe solaire plazaire сад. intégrée Rouge Funtime Gifts Светодиодная мини-лампа вулканического происхождения. -295 x 25 x 1195 мм Vision-EL 77759 Plafonnier LED L x I x H 38 Вт Алюминий / белый поликарбонат. Питание 360 ° от батареи Детское движение Paysage Led lumière extérieure Projecteur blanc.Cour Étanche Pour jardin allée Sans fil Lot de 2 lampes solaires dextérieur avec détecteur de mouvement demovement clôture.

Рекомендуемый порядок фиксации и заделки корня …

Фиксация корневых сегментов для микроскопии исследований нематод и центра визуализации Техасского университета A&M http://www.tamu.edu/mic контакт: [email protected] 1 Фиксация и встраивания корневых сегментов для исследований нематод.Протокол разработан Энн Эллис, составлен Стэном Вита. Образцы: сегменты выращенных в почве промытых молодых корней , длиной 3-6 мм, диаметром ~ 1 мм, с паразитическими нематодами на разных стадиях развития. Меры предосторожности: Все операции по хранению и растворов химикатов и следует проводить в химическом шкафу в перчатках и для . > лабораторный халат. Используемые химические вещества являются токсичными, тератогенными или раздражающими.Использованный фиксатор, содержащий акролеин, необходимо нейтрализовать дисульфатом калия, чтобы от него можно было утилизировать. Следует соблюдать осторожность с растворами, содержащими ДМСО. ДМСО способствует быстрому проникновению (фиксатора) в ткани (включая ваше собственное тело) даже при низких концентрациях, и может проникать через некоторые защитные перчатки. Следите за загрязнениями на коже или перчатках; промыть загрязненную кожу мыльной водой, заменить перчатки.Химические вещества из электронной микроскопии, если не указано иное. Четырехокись осмия, 4% водный раствор (EMS, каталожный номер 19150) Формальдегид (пара для мальдегида) 16%, класс EM, запечатанный в стеклянных ампулах (EMS, каталожный номер 15710) Глутаральдегид, класс EM, 50% в стеклянных ампулах (EMS, каталожный номер 16320) Акролеин, класс EM (EMS, каталожный номер 10100) Какодилатный буферный раствор, 0,2M, pH 7,4 ДМСО (диметилсульфоксид) (например, EMS, каталожный номер 13390) Оксид пропилена (EMS, каталожный номер 20400 ) ВНИМАНИЕ: Чрезвычайно легко воспламеняется.Канцероген. Несовместим с кислотами, основаниями, окислителями, медью, медными сплавами, латунью, бронзой, железом, хлоридами металлов, пероксидами и множеством других материалов. Реагирует с соединениями, содержащими лабильный водород. Фиксатор: (всегда готовьте свежий раствор для использования) Конечные использованные количества концентрации —————————- ——————————- 0,133 М какодилатный буфер, pH 7,4 6,65 мл 0,2 М маточный 2% Глутаральдегид 0,4 мл 50% глутаральдегид 2% для мальдегида 1.25 мл 16% пара для мальд. 2% акролеин 0,2 мл 1,5% ДМСО 0,15 мл —————————————- ——————- добавить ультрафильтрованную или дистиллированную воду в 10 мл

Одноразовые биореакторы | SpringerLink

Об этой книге

Введение

За последние пять лет огромное финансовое давление на разработку и производство биофармацевтических препаратов привело к увеличению использования и распространению одноразовых изделий, которые выбрасываются после сбора урожая и поэтому предназначены только для одноразового использования.Фактически, такие одноразовые изделия используются сегодня на всех основных этапах производства биотехнологий, и прогнозируется даже более высокий рост, чем на рынке биофармацевтики (двузначный показатель). Наряду с одноразовыми фильтрующими капсулами, на рынке уже доступны мембранные хроматографические устройства, трубки, соединители, гибкие контейнеры, обрабатывающие или содержащие жидкости, морозильные системы, смесители и насосы, а также полностью управляемые одноразовые биореакторы объемом до 2000 л. Многочисленные исследования подчеркивают преимущества одноразовых биореакторов и раскрывают их потенциал для простого, безопасного и быстрого производства посевного материала, разработки процессов и производства малых и средних объемов (например,грамм. биоактивные вещества, вирусы для вакцин и генной терапии и т. д.). Они предполагают, что такие одноразовые биореакторы (обычно характеризующиеся камерой для культивирования или мешком из пластмассовых материалов) могут быть полезными для клеток растений, животных и микробов. Осуществление промышленных мероприятий, таких как CFD-моделирование, разработка одноразовой технологии мониторинга и контроля процесса, а также стандартизованные составы пленок, пытаются устранить ограничения существующих одноразовых биореакторов. Эти достижения, наряду со значительным увеличением выхода продукции, позволят сократить использование нержавеющей стали на предприятиях по производству биотехнологий в будущем.

Ключевые слова

Биохимия Биореактор Биотехнология Последующая переработка Фармацевтика Терапия Тканевая инженерия Транспорт

Редакторы и филиалы

1. 1.Hochschule WädenswilWädenswil, Швейцария,
2. Рубрики Разное