Техника окрашивания эйр тач: техника выполнения и фото с идеями

Содержание

Окрашивание волос Airtouch (Аэртач): новая техника

Смешение теней и разных тональностей на волос в наше время считается пиком моды. Но четкое разделение границ темных и светлых прядей, как в мелировании, не совсем актуально. В моде естественность, а потому современные девушки все больше обращают внимание на новую технику окрашивания — airtouch (эйртач, аэртач).

Дословно слово переводится с английского как «воздушное прикосновение». Так называть окрашивание начали из-за применяемой техники — перед тем, как разделить локоны «на разноцветные» мастер продувает их потоком воздуха. Окрашивание практически не заметно на волосах — тонкая грань между тональностями делает цвет волос максимально натуральным. Также назвали окрашивание «воздушным» из-за его мягкого воздействия на волосы — такая техника практически не разрушает локоны.

Главный принцип окрашивания заключается не в выборе тональностей и прядей, а в возможности последующей коррекции, которая не повредит локоны. Волосы остаются живыми и здоровыми, а стыки между корневой зоной и длиной практически незаметны.

Техника окрашивания Аirtouch — в чем принцип

Методика предполагает осветление тонких полос в волосах, которые как бы растягиваются от корней к кончикам. Локоны берутся минимальной толщины, что позволяет в цвете играть массе тональностей — зебра при аэртач не предполагается.

Проводится окрашивание не без помощи фена. Мастер отделяет локон и подает на него струю холодного воздуха. Таким образом обесцвечиванию поддается основная масса локона, без затрагивания мелких волосков и возможной пористости.

Преимущества окрашивания Аirtouch

Блондинкам такая техника окрашивания делается уже везде и всюду, а вот за брюнеток и шатенок пока берутся только самые продвинутые мастера, которые не боятся сложностей и возможной неудачи в достижении полной естественности.

Качественно сделанное осветление тонких локонов придает волосам объема, делает из более ухоженными на вид. Создается впечатление, что пряди переливаются и на них отражаются естественные блики. Причем даже не под лампой и не при солнечной погоде.

Окрашивание помогает избавиться от бледности внешности, сделать волосы более яркими, выразительными и притягательными. Он придает оттенку волос глубины, хотя на первый взгляд локоны кажутся и вовсе «натурального оттенка».

Русым волосам подходят как осветленные локоны, так и окрашивание в более глубокие темные тона. Блондинкам в локоны вкрапляют серую и даже седую палитру, а рыжим девушкам подходят карамельные и медовые блики.

Тонирование Аэртач делается и в диковинных цветах, если на то есть такая потребность. И хоть цвет волос совсем не естественный, смотрится окрашивание максимально натурально.

Как проходит окрашивание Аirtouch

Главное, о чем стоит беспокоиться женщинам, так это о поиске хорошего мастера, который сможет осилить новую технику максимально профессионально. Также не стоит забывать о том, что волосы все же обесцвечиваются, так что важно приобрести качественную краску и окислитель.

Если хочется попробовать технику дома, то стоит знать несколько главных изюминок:

  • окрашивание проводится на чистых волосах;
  • обесцвечивание нужно начинать с нижних слоев волос;
  • краска наносится на кончики волос, а на корни растягивается расческой или гребнем;
  • использовать для окрашивания можно только холодный воздух;

Читайте также: Твидовое окрашивание в моде в 2020 году 

Важно при любом окрашивании, в том числе и щадящем, правильно ухаживать за волосами, чтобы они оставались здоровыми и красивыми:

  • мыть окрашенные волосы важно только мягким шампунем;
  • намыливать стоит только корни, а длину смывать пеной;
  • не стоит забывать об ухаживающих увлажняющих масках для волос;
  • отдельного питания требуют кончики локонов, а потому не стоит пренебрегать флюидами и сыворотками.

Аirtouch на фото

\

Больше о последних веяниях моды читайте в нашей рубрике «Для женщин».

Хотите читать больше интересных и познавательных статей для женщин? Подписывайтесь в наши группы!

FacebookКрасотка в 30, 40, 50 и старше

ОдноклассникиКрасотка в 30, 40, 50 и старше

окрашивание AirTouch (Аиртач) в Москве, мелирование в технике AirTouch, стрижки, маникюр, педикюр и др.



































































































































Наименование Время, мин Цена, руб
Чистка
Чистка лица ультразвуковая 60 3500
Чистка лица мануальная 75 4200
Чистка лица атравматичная (Косметика HOLY LAND) 75 4500
Чистка лица + химический пилинг 90 5200
Чистка спины комбинированная 120 от 5200
Неинвазивная карбокситерапия (Carboxy CO2 Gel) с массажем 45 3500
Удаление жировика (1 ед.) 10 500
Уход за лицом
Уходы за лицом ERICSON LABORATOIRE (Франция)    
«BIOPURE» КИСЛОРОДНАЯ ТЕРАПИЯ Уход за «городской» кожей 75 6 500
«HYDRA CLINIC» Уход за сухой и обезвоженной кожей 75 6 500
«SENSETIVE PRO» Уход за гиперчувствительной кожей лица 75 6 500
«BIOLOGIC» Программа восстановления баланса кожи 75 6 500
«SUPREME DHE/AGE-RETINOX» Уход-омоложение для зрелой кожи 75 6 500
«ENZYMACID» BIOPURE» Комбинированный и пролангированный пилинг 75 6 500
Уходы за лицом на основе оригинальных масок    
ОМОЛАЖИВАЮЩИЙ УХОД С ЯПОНСКОЙ ВОДОРОДНОЙ МАСКОЙ AMENITY

Очищение, массаж, водородная маска-уход, завершающий крем
60-75 6 500
«ВИТАМИННЫЙ ЗАРЯД» ЭКСПРЕСС-УХОД ДЛЯ СУХОЙ И ОБЕЗВОЖЕННОЙ КОЖИ С КЛЮКВЕННОЙ ГЛИКО-МАСКОЙ
Очищение, массаж, гликомаска-уход, завершающий крем
45-60 3 500
АНТИСТРЕССОВЫЙ ЭКСПРЕСС УХОД «ДЕТОКС» ДЛЯ ВСЕХ ТИПОВ КОЖИ С ШЕЙК МАСКОЙ (С АКТИВИРОВАННЫМ УГЛЕМ)
Очищение, массаж, шейк-маска-уход, завершающий крем
45-60 3 500
АНТИ-ЭЙДЖ МОДЕЛИРУЮЩИЙ УХОД «ЭНЕРГИЯ МОЛОДОСТИ» С СОГРЕВАЮЩЕЙ ТЕРМО-МАСКОЙ
Очищение, массаж, гипсовая термомаска-уход, завершающий крем
45-60 5 000
«ЭФФЕКТ ЧИСТОТЫ» ДЛЯ ЖИРНОЙ И КОМБИНИРОВАННОЙ КОЖИ С ТЫКВЕННОЙ МАСКОЙ
Очищение, массаж, маска-уход, завершающий крем
45-60 3 500
КОМБИНИРОВАНЫЙ УХОД «ГЛУБОКОЕ ОЧИЩЕНИЕ АЭРО» ДЛЯ ВСЕХ ТИПОВ КОЖИ С У/З ЧИСТКОЙ И АЭРО МАСКОЙ
Очищение, аэромаска, у/з чистка, завершающий крем
50-60 4 500
ЭКСПРЕСС УХОД «МГНОВЕННОЕ ПРЕОБРАЖЕНИЕ» С КАРБОКСИ-МАСКОЙ СО2 GEL
Очищение, массаж, маска-уход, завершающий крем
45 3 500
РЕГЕНЕРИРУЮЩИЙ УХОД С ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТОЙ «КОЛАГЕНОВЫЙ ЛИСТ»
Демакияж, глубокое очищение, массаж, маска-уход, завершающий крем
60-75 5 500
«ANTI-AGE УХОД» С ОМОЛАЖИВАЮЩЕЙ БЕТАГЛЮКАНОВОЙ ЛИФТИНГ- МАСКОЙ

Очищение, массаж, маска-уход, завершающий крем
45 3 500
ПОСТПИЛИНГОВЫЙ УХОД С УСПОКАИВАЮЩЕЙ БЕТАГЛЮКАНОВОЙ МАСКОЙ
Очищение, маска-уход, завершающий крем
20–30 2 500
УХОД ДЛЯ КОЖИ ВОКРУГ ГЛАЗ «КВАРЦЕВАЯ СЮИТА»
Очищение, массаж, патчи, стоунтерапия, завершающий крем
300 2 000
Массаж лица
Хиромассаж лица, шеи и зоны декольте 40 3500
Скульптурный массаж 60 4000
Скульптурно-букальный массаж с уходом 90 5000-7000
Массаж по Жаке 15 1700
Депиляция воском
Депиляция бикини (глубокое) 60 2500
Депиляция бикини (лайн) 45 1800
Депиляция подмышек 20 800
Депиляция рук до локтя 15 800
Депиляция рук предплечье 15 800
Депиляция рук полностью 30 1200
Депиляция ног ниже колена 20 800
Депиляция ног выше колена 20 800
Депиляция ног полностью 45 1400
Депиляция ягодиц 20 800
Депиляция зоны над верхней губой/усы 15 500
Депиляция лба 20 500
Депиляция подбородка 15 500
Депиляция скуловой зоны 20 500
Депиляция спины полностью 45 1600
Депиляция спины до середины 30 1000
Депиляция зоны живота 20 800
Мужская депиляция
Депиляция зоны над губой /усы 500
Депиляция лба 500
Депиляция скуловой зоны 500
Депиляция подбородка 500
Депиляция рук до локтя 1000
Депиляция рук — предплечье 1000
Депиляция рук полностью 1500
Депиляция ног ниже/выше колена 1000
Депиляция ног полностью 2000
Депиляция подмышек 800
Депиляция спины до середины 1000
Депиляция спины полностью 2000
Депиляция бикини «лайн» 2000
Депиляция бикини глубокое 3000
Депиляция комплекс toy (2 зоны) 3420
Депиляция комплекс light (3) 4080
Депиляция комплекс absolute (5) 5840
Средство « skin sistem» , задерживающие рост волос (обработка 1 зоны после эпиляции) 200
Сахарная депиляция (Шугаринг)
Сахарная депиляция лица    
Сахарная депиляция зоны над верхней губой (усы) 15 600
Сахарная депиляция лба 20 600
Сахарная депиляция подбородка 15 600
Сахарная депиляция скуловой зоны 20 600
Сахарная депиляция рук    
Сахарная депиляция подмышек 20 800
Сахарная депиляция рук до локтя 15 900
Сахарная депиляция рук — предплечье 15 900
Сахарная депиляция рук полностью 30 1500
Сахарная депиляция ног    
Сахарная депиляция ног ниже колена 20 1000
Сахарная депиляция выше колена 20 1000
Сахарная депиляция ног полностью 45 1700
Сахарная депиляция бикини    
Сахарная депиляция бикини (лайн) 45 2000
Сахарная депиляция бикини (глубокое) 60 2700
Сахарная депиляция живота    
Сахарная депиляция зоны живота 30 800
Сахарная депиляция мужская    
Депиляция мужская, 1 зона 40 1200
Гелевая эпиляция (Гелинг)
Гелевая эпиляция — верхняя губа

770
Гелевая эпиляция — одбородок

770
Гелевая эпиляция — подмышки

1650
Гелевая эпиляция — голени

2200
Гелевая эпиляция — бедра

2750
Гелевая эпиляция — ноги полностью

4400
Гелевая эпиляция — бикини глубокое

3300
Гелевая эпиляция — бикини классическое

2750
Гелевая эпиляция — предплечье

2200
Гелевая эпиляция — руки полностью

2750
Пилинг лица
Химический пилинг Enerpeel миндальный 40 5000
Химический пилинг Enerpeel гликолевый 40 5000
Химический пилинг Джесснера 40 5500
Фруктовый пилинг Age Control-Superlift 30 3000
АHA пилинг (как дополнение к уходу)

1000
Ретиноевый пилинг 40 6000
Ренофаз (клеточный пилинг лица + массаж) 60 6000
Ренофаз (клеточный пилинг «лицо и декольте» + массаж) 60 8000
Пилинг PRX-T33 кисти/ лицо/ шея / декольте 60 4500-8000
Пилинг гликолевый кистей рук (дополнение к уходу)

1000
Перманентный макияж Лонг-Тайм-Лайнер
Перманентный макияж бровей 120 15000
Перманентный макияж глаз 120 15000
Перманентный макияж губ 120 15000
Коррекция макияжа бровей (через 30-45 дней) 120 7500
Коррекция макияжа глаз (через 30-45 дней) 120 7500
Коррекция макияжа губ (через 30-45 дней) 120 7500
Восстановление цвета бровей, РЕФРЕШ (через 1 год) 120 15000
Восстановление цвета глаз, РЕФРЕШ (через 1 год) 120 15000
Восстановление цвета губ, РЕФРЕШ (через 1 год) 120 15000
Прокалывание ушей пистолетом
Прокалывание ушей пистолетом   2000
RF-лифтинг

Кол-во процедур: 1 Кол-во процедур: 5
RF-лифтинг на аппарате Revital   Цена за 1 процедуру, руб Цена за 1 процедуру, руб
RF-лифтинг все лицо 20 2500 2000
RF-лифтинг область вокруг глаз 10 1500 1000
RF-лифтинг подбородок + шея 30 3000 2500
RF-лифтинг лицо + шея + декольте 50 5000 4000
RF-лифтинг подбородок 10 1500 1000
RF-лифтинг декольте или плечи 20 2500 2000
RF-лифтинг кисти рук 20 2500 2000
Микротоки для лица
Микротоковый уход для лица «Волшебные ручки красоты» (Япония) 90 6000
Лимфодренаж, интенсивное увлажнение, микротоковый пластический массаж лица.

Сочетание ручных методик с электроимпульсами низкой чистоты, идентичной микротокам человеческого организма.

1. Очищение

2. Пилинг

3. Микротоковый массаж лица

4. Маска по типу кожи

5. Завершающий крем-уход


Микротоковый массаж лица 45 3500
Д’Арсенваль 15 500
Ионофорез
Ионофорез 30 1600
Ионообогащение: введение питательных веществ в глубокие слои кожи помощью гальванического тока малой силы

1. Насыщение кожи активными компонентами

2. Улучшение кровообращения

3. Интенсивное увлажнение

4. Повышение упругости и эластичности кожи

5. Сужение пор

6. Выравнивание цвета и рельефа кожи
 
Ультразвуковой лифтинг 30 1600
Ультразвуковой массаж + ультрафонофорез

1.Мгновенный лифтинг

2.Повышение упругости и эластичности кожи

3.Разглаживание морщин

4.Красивый, ровный цвет лица
 

Окрашивание волос АIRTOUCH | ПурПур

В 2018 году техника airtouch — на пике популярности. После ее применения волосы приобретают эффект естественных переливов оттенков, которые особенно красиво смотрятся на солнце. При этом блеск и элегантный вид волос сохраняются надолго — от шести месяцев до года, в зависимости от индивидуальной скорости их роста.

Окрашивание способом airtouch подходит и брюнеткам, и шатенкам, и блондинкам, и обладательницам рыжих волос. Оно делает их визуально более объемными, блестящими, насыщенными новыми оттенками почти при любой длине, исключаются только очень короткие стрижки. В последнем случае специалисты рекомендуют выбрать другой способ колеровки.

Как выполняется окрашивание волос способом эйр тач? Суть метода в том, что мастер, используя фен, направляет струю холодного воздуха на каждую прядь. В результате тонкие и короткие волоски из нее выбиваются, а воздействию красителя подвергаются только длинные и волосы. Именно поэтому цвет получается таким неоднородным и необычным.

Для лучшего эффекта шевелюру необходимо разделить на тонкие пряди. При использовании техники окрашивания аиртач каждую из них обертывают термобумагой, хлопковой тканью или фольгой. Процедура требует от мастера немало терпения, вкуса и хорошо отработанных навыков, а от салона — широкого выбора профессиональных красителей высокого качества. Клиенту же перед окрашиванием волос методом airtouch нужно иметь в запасе от четырех до девяти часов свободного времени — именно столько необходимо для выполнения процедуры.

Чтобы избежать повреждения волос и добиться отличного результата, аirtouch стоит делать в салоне. Эту эксклюзивную парикмахерскую услугу качественно оказывают опытные мастера парикмахерской «Пурпур» в Колпино. Они не только знают все тонкости техники окрашивания волос airtouch, но и применяют новейшие средства для их защиты.

Как многие другие способы внешнего преображения, airtouch придумали стилисты Голливуда. В переводе с английского название метода означает: прикосновение воздуха.

После того, как технику airtouch освоили на Западе, ею увлеклись и российские специалисты.

Сегодня методикой аиртач интересуется все больше женщин, а также длинноволосых мужчин. После посещения салона красоты «Пурпур» в Колпино их прически выглядят как образцовый результат применения техники окрашивания волос airtouch.

 


Все подробности о наших услугах вы можете узнать по телефону: 924-12-01
Наш адрес: г. Колпино, Оборонная ул., 1, ТК «Ока» (Лента), 1-й этаж, место 1
Мы работаем с 10:00 до 21:00 ежедневно, без обеда и выходных.
Мы ВКонтакте

Окрашивание AirTouch АирТач, тренды 2021-2022

Окрашивание AirTouch — АирТач — Легкое и невесомое окрашивание завоевывает все большую популярность. Это и неудивительно, ведь только эта техника покраски волос позволяет получить невероятно натуральный результат и свежий цвет в сочетании с вашим натуральным.

В этой статье вы узнаете

  1. Преимущества окрашивания AirTouch
  2. Аиртач на коротких волосах
  3. AirTouch на длинных волосах
  4. Технология окрашивания

Окрашивание AirTouch — АирТач

Окрашивание AirTouch АирТач — преимущества

Техника AirTouch дает удивительные результаты натурального вида волос.

Самое главное преимущество использования AirTouch ㅡ оно не требует частого окрашивания. Растяжка цвета настолько плавная и рассеянная, что натуральные отросшие корни остаются практически незаметными. А значит к парикмахеру можно будет заглядывать не чаще 1 раза в 3 месяца.

Дополнение к плавности растяжки цвета ㅡ абсолютно натуральный эффект выгоревших объемных волос. Пряди буквально вплетаются в ваш натуральный тон, поэтому нет «кричащих» полос, перьев и пеньков.

АирТач наполняет волосы объемом за счет светлых оттенков. Парикмахеры настоятельно рекомендуют этот вид окрашивания обладательницам тонких волос, девушек с узким лицом. С таким окрашиванием любая стрижка будет смотреться намного объемнее и не будет требовать долгих укладок брашем. Да-да, даже для коротких волос, в отличии от более привычного омбре, AirTouch ㅡ вертикальная растяжка цвета. А значит и короткие стрижки могут заиграть плавными переходами и природным объемом.

При этом этот вид окрашивания максимально щадящий ㅡ краской обрабатывается от 30 до 50% ваших волос. При окрашивании обрабатываются только самые длинные пряди, из которых выдувают пушковые волосы и более слабые и тонкие, а значит еще меньше повреждений для вашей шевелюры.

Еще один плюс за AirTouch ㅡ мягкость самой процедуры окрашивания. Вместо жесткого начесывания волос как при окрашивании омбре или при балаяже, волосы обрабатывают безопасным холодным воздухом из фена.

Обучение окрашиванию волос: «Air Touch», «Shatush», «Balayage», «Ombre», «Grundj», «Shurp» за 3 неделе по цене 4-х окрашиваний AirTouch! Перейти на сайт…

Получи профессию «Колорист» В Академия Парикмахерского Искусства и Дизайна Анастасии Капраловой.

Колористика – это возможность творческой реализации с достойным заработком. Записывайтесь на бесплатный  ознакомительный пробный урок…

Аиртач на коротких волосах

Играет, блестит и переливается ㅡ покраска волос AirTouch применима к любой длине волос. За счет диагональной растяжки цвета в окрашивании нет границ, есть только мягкие переходы. А значит оно выгодно смотрится и на каре и на длинных волосах.

Аиртач на коротких волосах

Почему стоит выбрать окрашивание AirTouch АирТач для короткой стрижки? Это отличная альтернатива не такому актуальному мелированию. Вы сможете сменить имидж с минимальным вредом для ваших волос.

Также AirTouch актуален для сложных стрижек, которые требуют ежедневной укладки для придания объема. При помощи бликов визуально волосы обретают объем, поэтому вы будете тратить намного меньше времени и стайлинговых средств.

Этот вид окрашивания подходит для стрижек с любой челкой, будь она прямая или асимметричная ㅡ мягкие переливы коснутся любой, и она не будет выбиваться из общей концепции покраски.

AirTouch на длинных волосах

В этом сезоне АирТач стал трендом на подиумах для длинноволосых блондинок. Да что там подиумы, это окрашивание уже оценили Светлана Лобода, Вера Брежнева и множество других селебрити.

AirTouch на длинных волосах

AirTouch идеально будет смотреться на ровных волосах и на кудрях. А еще наконец решит проблему отросших корней и походов к парикмахеру каждые 2 недели. Даже блондинки с этой техникой окрашивания смогут гораздо реже тонировать корни за счет мягких переливов цвета.

AirTouch на кудрях

Но и брюнетки в плюсе. AirTouch идеально смотрится на каштановых волосах, насыщая их медовыми или медными бликами, делая цвет более глубоким, а волосы в разы объемнее.

Брюнетки AirTouch

Окрашивание AirTouch АирТач помогает не менять имидж радикально, но при этом привносит абсолютно новый вид, а соответственно и настроение.

Академия Парикмахерского Искусства и Дизайна Анастасии Капраловой

Приглашает посетить бесплатный пробный урок парикмахера для ознакомления с программой обучения, преподавателями — это поможет Вам сделать правильный выбор перейти на страницу записи…

Г. Москва, м. Текстильщики, ул. Саратовская улица, 14/1, Время работы с 9:00 до 19:00, без выходных.

Телефон отдел обучения +7(495) 532-57-49 и +7(925) 722-97-51

Телефон записи моделей +7(925) 198-31-08

Техника окрашивания аир тач 2021 года: стильные примеры фото

Техника окрашивания аир тач 2021 года: стильные примеры фото

На чтение 7 мин. Просмотров 875 Опубликовано

Современные колористы и парикмахеры предпочитают использовать более одного цвета в окрашивании. Однотонный плоский цвет давно ушел в прошлое. При многоцветном колорировании Airtouch, прическа будет выглядеть более объемной, стильной, натуральной. В переводе с английского Airtouch означает «прикосновение воздуха». Особенность этой техники: прядь для последующего осветления выбирают таким образом, чтобы отсечь все маленькие и непослушные волоски. Ненужные волоски убирают при помощи холодного воздуха фена. Оставшиеся пряди осветляют либо окрашивают в нужный цвет. Краситель выбирают в соответствии с предпочтениями клиента, его природного цветотипа. Немаловажную роль играет актуальность тех или иных цветов. На сегодня в моде пепельные и серебристые оттенки. Для осветления подбирают любой щадящий краситель, который предложит мастер или салон. Если девушка остается блондинкой, волосы просто тонируют любым средством, нейтрализующим желтизну. Также используют корректор с синим, или фиолетовым тоном, который уберет желтизну после осветления и придаст благородный пепельный отлив.

Как окрасить волосы техникой аир тач — новинки и тренды 2021 фото

Дословно Airtouch переводится как «прикосновение воздуха». Такое название придумано не зря. Пряди волос специалист выбирает по определенной схеме, порядок соблюдается конкретный. Сейчас существует несколько вариантов схем. Самое интересное в этом окрашивание — использование обычных инструментов. Каждую прядку мастер обдувает феном так, чтобы тоненькие короткие волоски выпадали из общей массы, а оставшиеся в руке прокрашивались в выбранный цвет. Существует много секретов нанесения краски, которыми мастер владеет в полной мере. К ним можно отнести:

  • прядки выбирают маленькие, толщина не больше сантиметра;
  • прядку осветляют не полностью — только поверхностно, колорист наносит аккуратно в верхней части головы вертикальные мазки;
  • корневую зону предварительно затемняют, если требуется добиться эффекта градиента;
  • к концам цвет уже более плотный;
  • краску мастер наносит так, чтобы переходы были плавными, граница между светлым и темным — незаметной;
  • для осветления используют краситель более 8 тона, для темнения корней — 4–6;
  • каждый локон могут укутывать фольгой, чтобы усилить степень окрашивания;
  • когда используют большее количество прядок, то и конечный результат получится лучше, после осветления волосы окрашивают уже в любой выбранный цвет.

Конечно, разделение прядей достаточно кропотливое, зато волосы после процедуры приобретают красивые переливы, переходы. При таком осветлении нет жестких переходов, как у омбре и мелировании. Например, при омбре происходит плавный переход к светлым кончикам от темных корней. Есть и обратное омбре. А при Airtouch всегда обрабатываются отдельные прядки. Получается более щадящая окраска.

Окрашивание аир тач для темных волос 2021 фото идеальных вариантов

Хорошо смотрится колорирование, выполненное в технике Airtouch на темных локонах. Брюнеткам можно придать объем, интересный оттенок, переливы и блики своим локонам с помощью airtouch. Какой выбрать дополнительный тон, и какой процент волос окрашивать решает клиент совместно с мастером. Профессионал всегда подскажет правильное решение и поможет выбрать подтон. На темных локонах хорошо смотрится вся палитра рыжего, карамели, шоколада. В летнем сезоне 2021 года модны яркие винные тона, либо цвета из палитры синего. Такие яркие акценты хорошо смотрятся на иссиня-черных волосах.

Окрашивание аир тач для русых волос 2021: свежие идеи, фото

В переводе с английского языка «air touch» значит «прикосновение воздуха». При таком сложном и многоцветном окрашивании на волосах создаются плавные и нежные переливы тонов, что позволяет достичь появления объема и глубины цвета. Окрашивание все набирает свою популярность, так как в моде легкость и естественность. Оно заменяет собой устаревшие техники, такие как мелирование, омбре и однотонное окрашивание волос. Волосы при этом окрашиваются не полностью, а 30%-50% от всего объема. Для начала из всех волос отбираются некоторые пряди в специальном порядке (существует несколько схем). Затем каждая по очереди прядка обдувается феном так, чтобы все самые коротенькие и тоненькие волоски выпали, ведь окрашиваться будут только те, что не «выдулись». При таком осветлении волос исключены жесткие и резкие переходы, в то время как при других окрашиваниях существует огромный риск получить таковые.

Техника окрашивания аир тач 2021 фото на коротких волосах

Техника эйр тач может похвастаться своей универсальностью. Она действительно подходит 99% девушек. Структура и объемность волос не имеет никакого значения. Ваш возраст, социальный статус, стиль жизни также не играет важной роли – плавные переходы оттенков идут всем. Многие ошибочно полагают, что тонкие и ослабленные волосы лучше не подвергать воздействию краски.

Мы же говорим обратное – при грамотном подходе волосы обретут новую жизнь! Эйр тач – это щадящий метод, который преобразит волосы в печальном состоянии. Эйр тач прекрасно смотрится как на темных волосах, так и на светлых. Этот эффект можно воспроизвести и на каштановой шевелюре – результат такой же потрясающий. Техника окрашивания эйр тач – это чудо-способ, делающий волосы объемнее и привлекательнее. Фото девушек, которые уже решились на этот модный тренд, доказывают: эйр тач – это стильно, красиво и презентабельно.

Модное окрашивания волос аир тач 2021 фото на светлых волосах

Техника окрашивания AirTouch очень похожа на балаяж/шатуш, и если вы не колорист, то, действительно, невооруженным взглядом вы можете и не отличить одно от другого. Но на самом деле, эти две техники достаточно отличаются, хотя бы тем, что используются разные способы нанесения краски на волосы. При выполнении балаяжа все волосы делятся на пряди, и затем каждая начёсывается. На оставшиеся же волосы наносится обесцвечивающий краситель. Шатуш чаще делается на темных волосах, выполяется «растяжка» цвета по длине волос от темного цвета к более светлому. В отличие от знакомого всем мелирования, при выполнении AirTouch окрашивания выделенная прядка прокрашивается полностью.

Окрашивание волос – самая актуальная процедура у всех прекрасных дам, которые следят за последними новинками бьюти-индустрии и стремятся всегда «держать руку на пульсе». На светлых волосах, чтобы достичь красивого эффекта отросших волос, можно слегка затемнить корни, выбирая оттенок, наиболее приближенный к естественному. Кроме того, можно тонировать осветленные пряди в различные оттенки блонда – от клубничного до стального. Вне зависимости от исходного цвета волос окрашивание в технике ЭйрТач позволяет получить очень неожиданные и эффектные результаты.

Техника окрашивания аир тач 2021 — свежие отзывы

Подводя итоги, стоит заметить, что один из главных недостатков метода окрашивания ЭйрТач – это невозможность выполнения в домашних условиях. Нельзя сказать, чтобы это было совсем невозможно, но для того, чтобы достичь по-настоящему качественного окрашивания в этой технике нужно иметь немалый опыт и определенные навыки. Самостоятельно выполнить «процедуру» не стоит даже и пытаться, так как это очень неудобно и нужного эффекта добиться у вас вряд ли получится. Если вы всегда привыкли быть в тренде и следите за всеми новинками в мире моды и красоты, то не попробовать окрашивание волос по технологии АirTouch – это настоящее преступление против вашего образа. Вне зависимости от того, какой длины и цвета ваши волосы сегодня, ЭйрТач добавит неповторимые оттенки!

Минусы окрашивания волос техникой эир тач 2021

Прежде всего это окрашивание требует много времени: от пяти и порой до восьми часов. Это зависит от длины и типа волос, а также от того, какую зону приходится прорабатывать. За счет этого окрашивание порой влетает в копеечку. Еще один минус заключается в том, что сейчас появилось много мастеров-самоучек, которые посмотрели ролики в интернете и уже возомнили, что знают, как красить в airtouch. В итоге вам могут создать совсем не тот результат или же вовсе испортить волосы. Airtouch нужно учиться — как правильно распределять проборы, продувать пряди, нужно знать, как в итоге будут рассыпаться волосы, чтобы получить многомерный эффект. Для этого необходимы знания и эстетический вкус.

Какую краску используют при окрашивании волос аир тач

Очень важно правильно подобрать краску для новой прически. Во время этого процесса, необходимо учитывать исходный цвет волос, индивидуальные характеристики лица, цветотип и конечный результат, к которому хочется прийти. Можно брать тона теплой или холодной цветовой гаммы по желанию. Более выигрышно будут смотреться тона серебристо-пепельной палитры. Чтобы получить приятный пепельный оттенок, необходимо обработать осветленные волосы специальными пигментами прямого действия. Чтобы сделать все правильно, требуется добавить в красящую смесь корректор фиолетового или синего цвета, благодаря чему, обработанные волосы не будут в итоге отблескивать зеленым оттенком, а сам цвет станет действительно роскошным. Выдерживать необходимо строго по инструкции исходя из тех пигментов, которые применяются. Также необходимо брать во внимание тип и состояние волос.

В тренде 2018 — окрашивание по технике Airtouch

В сфере «beauty» вошла в моду не новая, но популярная и эффектная техника окрашивания волос – Airtouch. Благодаря этой методике удается достичь невероятного визуального эффекта для прически, которая будет актуальна практически для любого случая.

Сейчас в моде остается естественность на фоне сложных переходов. Окрашивание в один тон, алюминиевые блонды и контрастное мелирование прядями постепенно отошли на второй план. Теперь популярны нежные переливы тона на волосах, благодаря которым придается объем и создается уникальный стиль, который не достичь другими методами. Такой эффект предоставляет техника AirTouch.

Несмотря на то, что мелирование довольно известная процедура, применение окрашивания по технологии Airtouch требует еще и знаний в колористике.

Это необходимо для оптимального подбора цветовой гаммы и создания красивого рисунка прически кистью и расческой.

Техника нанесения состава

Перед началом работы, необходимо расчесать волосы по всей их длине. Мастер отделяет небольшую прядь волос, толщина которой не должна превышать 1 см и приступает к обработке воздушной струей из фена. Начинают подготовку волос с височной области.

Воздействие воздуха должно быть по всей длине, причем оно должно быть таким, чтобы от изначальной пряди волос осталась только треть или половина, исходя из результата, который требуется по окончании.

Во время воздействия воздухом, дополнительно выдуваются более слабые и короткие волоски, что также добавляет популярности этой процедуре, ведь таким образом они не подвергаются негативному воздействию, что им идет явно не на пользу.

Под ту часть пряди, которая осталась в руке, подкладывается фольга и прокрашивается волос таким образом, чтобы краска не попала на тот участок, который должен оставаться непрокрашенным. Далее прядь осторожно заворачивается в фольгу.

Красящий состав должен наносится с маленьким отступом от корней. Исходя от общей длины волос, отступ может варьироваться от 3 до 5 сантиметров. Сама граница прокрашивания должна иметь эффект естественного обесцвечивания, для этого ее делают немного размытой.

Секреты нанесения

Мастер должен подбирать время выдержки состава в индивидуальном порядке, исходя из структуры волос и состава осветляющей смеси. За процессом необходимо наблюдать визуально.

Если есть необходимость сделать «эффект омбре», для начала необходимо заняться прикорневой зоной, ее требуется затемнить. Неплохо подойдет 4,5 или 6 тон. Нанесение краски должно производиться таким образом, чтобы переходы с осветления на волосы и наоборот, проводились максимально плавно.

Мягкость обеспечивается посредством небольшого захода кисти на прокрашенные участки и дальнейшим расчесыванием волос, которые уже были осветлены.

Таким образом смесь для окрашивания ложится мягче.

В случае, когда нет цели осветлять волосы, тогда по окончании затемнения волос в прикорневой области, на всю длину необходимо нанести красящую смесь выбранного цвета. Используя технику Airtouch, волосы в тех прядях, которые были выбраны для прокрашивания, окрашиваются полностью, что отличается от классического мелирования.

Для того чтобы придать прическе еще большего объема, мастера прокрашивают кончики волос немного светлее, чем основной цвет прокрашивания прядей, тем самым добиваясь эффекта сияния.

По окончании процедуры краску требуется смыть, обработать голову кондиционером, чтобы закрепить цвет, высушить волосы феном и уложить.

Кому подходит Airtouch?

Эта техника является уникальной и универсальной по следующим причинам:

  • Airtouch подходит практически для любой длины, структуры и цвета волос. Естественно, более симпатично такая техника будет смотреться у девушек с длинными волосами на прямой стрижке.
  • Применять технику можно на естественных темных, русых и светлых волосах. Также отлично смотрится и на окрашенных до этого волосах, создавая по желанию более темный или, наоборот, светлый оттенок.
  • Идеально подходит для делового стиля, похода в ночной клуб или даже для занятий спортом.

Применяемые краски

Очень важно правильно подобрать краску для новой прически. Во время этого процесса, необходимо учитывать исходный цвет волос, индивидуальные характеристики лица, цветотип и конечный результат, к которому хочется прийти.

Можно брать тона теплой или холодной цветовой гаммы по желанию. Более выигрышно будут смотреться тона серебристо-пепельной палитры.

Чтобы получить приятный пепельный оттенок, необходимо обработать осветленные волосы специальными пигментами прямого действия. Чтобы сделать все правильно, требуется добавить в красящую смесь корректор фиолетового или синего цвета, благодаря чему, обработанные волосы не будут в итоге отблескивать зеленым оттенком, а сам цвет станет действительно роскошным.

Выдерживать необходимо строго по инструкции исходя из тех пигментов, которые применяются. Также необходимо брать во внимание тип и состояние волос.

Особенности и преимущества окрашивания

Этот популярный метод имеет свои особенности и преимущества, благодаря чему у него так много поклонников:

  • Технология подразумевает выделение с использованием черного оттенка волос и использование янтарных оттенков.
  • Волосы становятся на вид более натуральными и приобретают видимую густоту, и объем. Визуальный объем достигается за счет тонких бликов.
  • Подходит для любого типа, вида, длины и цвета волос.
  • Такой метод придает всему образу элегантность с нотками романтики.
  • Благодаря тому, что в процессе, окрашивается не полностью все волосы, а только некоторые пряди, волосы не так сильно подвергаются агрессивному влиянию красящей смеси.
  • Результат остается на долгое время, потому как корни, что со временем отрастают, практически незаметны. Из-за этого, промежутки между походом к мастеру увеличиваются.
  • Благодаря цветовым контрастам, мастер может достичь омолаживающего эффекта.

Техника Airtouch популярна не просто из-за того, что мода и стиль постоянно меняются, а потому что она имеет массу неоспоримых преимуществ и великолепный итоговый результат. Быть красивой – огромный труд, но он будет вознагражден.

Загрузка…

Услуги | Салон красоты «Ланна Камилина&raquo

Окрашивание / правильный оттенок волос подчеркивает идеальный цвет лица. 

короткие волосы — 5500р,  волосы средней длины — 7000р,  длинные волосы — 8500р

Блики солнца / короткие волосы — 5500р,  волосы средней длины — 7000р,  длинные волосы — 9500р

Тонирование / рекомендуется между окрашиванием для поддержания сияющего оттенка Ваших волос.

короткие волосы — 4000р,  волосы средней длины — 5000р,  длинные волосы — 6000р

ФИТОламинирование / превращает волосы в видимую роскошь и экологический шик. Сочетание растительных ингредиентов восстанавливает гидролипидный баланс волоса,  разглаживает структуру изнутри.

короткие волосы — 7000р,  волосы средней длины — 8500р,  длинные волосы — 11000р

*ведущие мастера и креативный директор обслуживают по АРТ тарифу на окрашивание, который на 20-40% выше указанного.

ПРИГЛАШАЕМ на абсолютно бесплатный сеанс «РЕКОМЕНДАЦИЯ по цвету волос», чтобы определить стиль, техники, время исполнения и СТОИМОСТЬ. 




Модные ТРЕНДЫ 



ТЕХНИКИ:  




AirTouch / Эйр ТАЧ



— самая востребованная, сложная и долгая в создании. Тренд. 

 Преимущества: визуальное увеличение объема, длительный результат и эффект здорового сияния. Метод: волосы разделяют на пряди, а затем обдувают струей воздуха из фена, так, чтобы от каждой из прядок осталось примерно 30-50% первоначального объема, именно эти волосы и осветляются. AirTouch корректировать раз в 4-5 месяцев. 

 

BALAYAGE / Балеяж 


— поверхностное нанесение осветляющей пасты на Пряди для нежного рельефа и создания рисунка в стиле «Блики Солнца». 

NUDE BLONDE / Нюд Блонд 


Тренд. ОЧЕНЬ можно! Поддерживать макияжем и покрытием NUDE гаммы. Благородно прозрачные, невесомо лакшери стиль. NUDE — спокойное, натуральное окрашивание, в котором нет контрастности, а осветленные пряди могут отличаться друг от друга всего на 1-1,5 тона. Волосы должны выглядеть так, словно это ваш родной цвет. Светлый цвет школьницы. В основном для Nude выбираются мягкие и тёплые оттенки: песочный, ореховый, цвет капучино. Подходит для тех, кто не любит резкие или холодные оттенки, например, silver и хочет чего-то нового.  

 

БЭБИ Лайт 


— имитация нежно выгоревших на пляже волос. Можно исполнить осветляющим маслом. Смело предлагать школьницам и всем поклонницам стиля органик, естественности в стиле шик.

 

ICE Blonde / айс Блонд 


— самое желанное окрашивание девушек и модных парней. Есть одно ограничение: чтобы добиться такого чистого блонда, необходимо тотальное осветлить волос, используя мощные препараты. Не все волосы могут выдержать, необходимо ответственно подходить к такому решению и прислушиваться к профессиональному стилисту. Подходит юным особам, для провокации контраста: молодости и седины! Для женщин 30+ не очень рекомендуем, может придать серый цвет лицу и прибавить лишний возраст. Стиль Марии Антуанетты — шикарно смотрится на леди с чёкерами на шее.  

 


ШАМПУНЬ + КОНДИЦИОНЕР СИЛЬВЕР  — обязателен для самостоятельного мытья волос дома.

ОТТЕНКИ:  




Десертный цвет CARAMEL 



— подходит девушкам с темными оттенками волос и смуглой кожей. Вкусно смотрится. Долго держатся нюансы карамельных оттенков. 

VANILA Blonde / Ванила Блонд 


— для предпочитающих неконтрастные переливы мягких золотистых бликов. К тому же, что медовые оттенки считаются самыми устойчивыми и непривередливыми. Долгоиграющий цвет. С нюансом розового перламутра или несколько шампань РОЗЭ прядей — очень ТРЕНД! 

 

COOPER / Купер


— лакшери рыжий моно глянцевый цвет. Фиксируется витаминизированными яркими оттенками ламирирования. Быстро смывается, поэтому визит на поддержания своей рыжей роскоши неизбежен. Оттеночный шампунь NAPURA купер оттенка обязателен для мытья волос самостоятельно.  

 

SOFT Black / Софт Блэк


— для темноволосых и длинноволосых девушек, желающих деликатных невидимых обновлений. Чередование темных и осветленных слоев прядей позволяет создать мерцающий оттенок, мягкий рельеф, текстурность даже темному цвету волос. Идеально рекомендовать для чёлки и у лица. Стиль нанесения: торт Наполеон — тонкими слоями, которые вливаются в базовый органик Blanck цвет.  

 

SOFT Blonde / Софт Блонд 


— осветление светлых волос мягкими масками по краевым линиям и несколько AIR-TАCHE прядей сверху — быстрая ТЕХНИКА luxury BLONDE!  

 

GLOSS COLOR / Глосс колор 


— тонирование или ламинирование для всех, кому создали драгоценные техники мелирования через 3 недели для поддержания прекрасного ОТТЕНКА. Для всех, кто остерегается красить волосы, но хочет придать блеск и сочность родному цвету волос. Школьницам, мужчинам без седины, йогиням, беременным, после каникул.  




Art-TÂCHE / Арт Тач



— цветная яркая прядь или пара — для мгновенного эффектного изменения. 


Цвет изумруда, синий джинсы, фуксии. Дерзко. Стильно, эффектно. Возраст: 5+ Держится: 2 недели. 

Окрашивание Airtouch — лучшая техника сезона (50 фото) — Confetissimo

Мелирование, окрашивание, омбре, шатуш … Это точно не придумают парикмахеры. Теперь появился новый тренд — окрашивание airtouch.

Что такое окрашивание airtouch?

Staining airtouch с английского дословно переводится как «прикосновение воздуха». Вот где кроется красота окрашивания airtouch. Он легкий, воздушный, словно случайно.Очень похоже на слегка выжженные на солнце пряди.

Эта краска придает объем волосам, придает свежести всему образу и может сделать вас немного моложе.

Техника исполнения

Чаще всего окрашивание airtouch проводят в салонах. Но чтобы вы поняли суть процесса, мы его немного опишем.

Вам понадобится:

  • фольга;
  • фен;
  • 3% и 6% оксида;
  • пудра;
  • активатор связи.
  1. Начинается с смешивания порошка и 3% оксида + активатор связки.
  2. Волосы разделены на проборы.
  3. От затылка берется тонкая прядь. Волосы обдуваются феном, разделяя короткие.
  4. Под прядь кладем фольгу и наносим осветляющий состав. И закрываем фольгой конвертом.
  5. Далее работа продолжается с нескольких прядей от каждого пробора.
  6. Следующий шаг все тот же, но с 6% окислителем.

В результате на волосах получаются чудесные переливы.

Окрашивание airtouch блондинок

Блондинкам окрашивание airtouch поможет освежить цвет волос и добавить роскошный перелив. Цвет волос будет смотреться по-особенному.

Блондинки умеют делать пряди более пепельными или пшеничными. Все зависит от вашего желания.

Окрашивание airtouch брюнеток (шатенка)

Часто девушкам надоедает однотонный темный цвет волос и все чаще возникает мысль «А может быть ярче?» Проскальзывает здесь, и тогда окраска airtouch станет идеальным решением.Поскольку это окрашивание не затрагивает корни волос, оно начинается с уровня ушей. Вы можете легко вернуться к своему прежнему цвету без особой потери качества волос.

Крашение airtouch красный

Рыжие девушки выглядят по-особенному с окрашиванием airtouch. Эта раскраска сделает вас более кокетливой и игривой.

В солнечный день блики солнца сделают ваш цвет еще более привлекательным.

Airtouch светло-коричневая морилка

Окрашивание airtouch возможно под любой оттенок волос и русый не исключение. В вашем случае осветленные пряди в массе сделают вам волосы светлого цвета. Но при разном освещении окрашивание придаст волосам разные оттенки от темного до пшеничного.

источник

Bios 318 Окрашивание и интерпретация

Страница приветствия

Расписание


Фон


Методы


Подготовка СМИ

и обучение


[Подготовка мазка] [Процедура окрашивания по Граму и исследование] [Отрицательный результат
окрашивание] [Окрашивание спор [Наблюдение за живыми бактериями]

Важная информация, такая как форма и степень подвижности, может быть получена путем наблюдения за живыми бактериями с
фазово-контрастный или темнопольный микроскоп.Однако бактерии обычно окрашивают разными красителями, чтобы
для выявления различных свойств и увеличения контраста для просмотра с помощью обычной светлопольной микроскопии. Число
красителей были разработаны для различения спор, ядерных тел, капсул и характеристик клеточной стенки.

Методы окрашивания, которые мы будем использовать, убивают бактерии, снижая риск заражения патогенными организмами. С
жесткие клеточные стенки бактерий предотвращают искажение морфологии при высыхании, образцы можно разложить на стекле
слайд и высушенный воздухом, затем закрепленный на поверхности, быстро пропуская слайд через пламя, расплавляя комплекс
углеводы клеточных стенок к стеклу и убивают клетки.

Окрашивание по Граму обычно используется в качестве начальной процедуры при идентификации неизвестного вида бактерий.
Бактерии несут небольшой чистый отрицательный заряд и обычно связывают положительно заряженные красители, такие как метиленовый синий и кристаллический.
фиолетовый. Виды могут быть классифицированы как грамположительные, грамотрицательные или грамотрицательные в зависимости от способности, если
клетки, чтобы удерживать синий краситель. Грамотрицательные бактерии не сохраняют темно-синий цвет, но их можно контрастировать.
светло-красного цвета, чтобы их можно было увидеть в светлопольной микроскопии.Так как два красителя используются для различения типов
бактерий, окрашивание по Граму называется методом дифференциального окрашивания.

Окраска по Граму — это прямой метод, так как сами клетки сохраняют краситель. При непрямом или отрицательном окрашивании мазки
производятся путем смешивания материала с индийскими чернилами или кислотными красителями, такими как нигрозин. Кислотные красители имеют отрицательный заряд
и отталкиваются отрицательно заряженными клеточными стенками. Клетки остаются неокрашенными на темном фоне.

Некоторые виды продуцируют споры, которые представляют собой спящие клетки с утолщенными клеточными стенками. Споры часто обнаруживаются в граммах
окрашивания или с помощью фазово-контрастной микроскопии живых клеток, однако для
подтвердить или опровергнуть наличие спор в культуре. Как и в случае с окраской по Граму, окраска от спор позволяет различить споры.
на основе свойств клеточной стенки.

В лаборатории вы будете практиковать технику окрашивания по Граму на различных грамположительных и грамотрицательных бактериях.
выращены на разных типах сред.Вы научитесь технике негативного окрашивания красителем нигрозин для того, чтобы
чтобы четко различать формы бактерий. Вы также проведете окрашивание спор на соответствующие культуры. Ну наконец то,
вы будете наблюдать за живыми бактериями, чтобы ознакомиться с особенностями, которые можно увидеть без окрашивания, в том числе с клеточными
формы, модели ассоциаций и подвижность.

Подготовка мазка

Правильно приготовленный мазок выполняет две задачи. Это заставляет бактерии прилипать к предметному стеклу, так что они могут быть окрашены
и наблюдал.Он также убивает их, делая безопасным обращение с патогенными бактериями. Цель приготовления мазков
— научиться распознавать правильную плотность бактерий для размещения на слайде. Слишком много, и они перекрывают друг друга
давать ложные срабатывания или теснить друг друга, чтобы создать беспорядок. Слишком мало, и их нельзя расположить на слайде.

  • С помощью инструмента для травления стекла наметьте кружок на нижней стороне предметного стекла в каждой позиции, на которой вы планируете сделать мазок.Может быть расположено несколько кругов
    на том же слайде. Кружки помогают найти мазки, которые трудно увидеть невооруженным глазом, и помогают определить поверхность предметного стекла, на котором вы нанесли мазок.
  • Ползун должен быть обезжиренным. Хороший способ очистить слайд — несколько раз подышать на него, а затем растереть
    энергично удалите туман салфеткой Kimwipe или бумажным полотенцем. Когда горка очищается от тумана сразу после дыхания
    на нем он достаточно чистый.
  • Чтобы приготовить мазок из колонии, поместите полную петлю (~ 25 мкл) деионизированной воды на обведенный кружок.
    площадь. С соблюдением правил асептики удалите едва заметное количество материала из культуры с помощью петли или палочки и используйте петлю или палочку, чтобы смешать его с каплей. Постарайтесь полностью развести культуральный материал, чтобы не было видимых кусков материала.
  • Чтобы приготовить мазок из бульонной культуры, асептически удалите несколько петель культуры и распределите по области, обведенной кружком.
  • Дайте капле полностью высохнуть на воздухе (обычно пару минут на одну петлю).
  • Зажгите конфорку бунзена или конфорку Фишера и отрегулируйте, чтобы получить сильное пламя. Удерживая предметное стекло в горизонтальном положении с помощью прищепки, трижды пропустите его через пламя мазком вверх, чтобы убить бактерии и заставить их прилипнуть. Каждый проход через пламя должен занимать около секунды.
  • После охлаждения предметного стекла провести процедуру окрашивания.

Как испортить мазок

  • Забудьте чистить слайд
  • Используйте слишком много материала — перед сушкой на воздухе жидкость должна быть немного мутной и без твердых частиц
  • Используйте столько жидкости, чтобы она высыхала бесконечно
  • Нагрейте мазок перед тем, как дать ему высохнуть на воздухе, кипятите бактерии вместо того, чтобы прикреплять их
  • Перегреть мазок, расплавить стенки ячеек и, возможно, сломать предметное стекло

верх

Окрашивание по Граму

При окрашивании по Граму бактерии, прикрепленные к предметному стеклу, обрабатываются основным красителем, который электростатически связывается с отрицательно
заряженные клетки.Затем препарат обрабатывают протравой, такой как йод, с образованием нерастворимого комплекса краситель-йод.
Затем предметное стекло промывают спиртом для растворения и удаления красителя-протравы с грамотрицательных клеток, но не с грамотрицательных клеток.
положительные. Дифференциальная экстракция протравы обесцвечивающим агентом является критическим шагом, который отличает
бактерии. На заключительном этапе наносится контрастное пятно сафранин. Ячейки, которые были обесцвечены, примут
нанесите второй основной краситель, тогда как те, которые уже были окрашены первым красителем, этого не сделают.

Механизм дифференциальной реакции окрашивания с уверенностью не выяснен. Одна теория гласит, что
различия в химическом составе клеточной стенки объясняют реакцию окрашивания. Вторая теория утверждает, что
толстые стенки грамположительных бактерий обезвоживаются обесцвечивающим раствором и сжимаются, что приводит к
закрытие пор в стенке, улавливание протравы красителя внутри клетки. Более тонкая клеточная стенка грамотрицательных клеток
Обесцвечивающее средство легко проникает в бактерии.Что известно с уверенностью, так это критическая роль
клеточная стенка. Удаление или изменение стенки грамположительных организмов превращает их в грамотрицательные клетки.

Поскольку многие грамположительные бактерии с возрастом становятся грамотрицательными, окраску по Граму следует использовать в течение ночи.
культур. Образец с края колонии, где клетки активно растут.

Возможно, вы захотите носить средства защиты рук и одежду, которая вас не слишком заботит.Эти химические вещества не особенно токсичны, но они могут пачкать кожу и одежду. Пятна на коже обычно стираются менее чем за день, но пятна на одежде обычно необратимы.

Компоненты

Были использованы различные формулы для кристаллического фиолетового, сафранина и обесцвечивающего средства, и все они эффективны. В учебной лаборатории эти решения будут предоставлены в готовом виде.

  1. Кристаллический фиолетовый Грама: 1% водный краситель кристаллический фиолетовый; [Кристаллический фиолетовый Хакера] 2 г кристаллического фиолетового с содержанием красителя 90%,
    20 мл этилового спирта, 0.8 г оксалата аммония, 80 мл дистиллированной воды
  2. Йод по грамму: 1 г йода, 2 г йодида калия, 300 мл дистиллированной воды
  3. Сафранин по Граму: 4 г порошка сафранина, 200 мл безводного этанола, 800 мл дистиллированной воды
  4. Обесцвечивающее средство по Граму: 25% ацетон, 75% изопропиловый спирт

Если оставить предметное стекло покрытым пятном дольше рекомендованного времени, это не повредит, если пятно не высохнет. Никакой пользы тоже нет.

  • Поместите предметное стекло с мазками вверх на штатив в лотке для окрашивания. Возможно, вам будет удобно оставить прищепку прикрепленной. Залейте предметное стекло кристаллическим фиолетовым по Граму, чтобы покрыть весь высохший материал. Хорошей практикой является заливка всего слайда от края до края.
  • Через 60 секунд возьмите предметное стекло прищепкой и промойте пятно водой, разбрызгивая предметное стекло над пятном и смывая водой.
    над ним, пока вода не станет прозрачной.Чтобы слайд оставался «чистым», вы можете также промыть его нижнюю часть и убедиться, что пятно не осталось под прищепкой, где вы схватили слайд. Обратите внимание, что мазки будут окрашены в ярко-синий цвет.
  • Залейте предметное стекло йодом Грама (протравой), оставьте на 60 секунд, затем возьмите предметное стекло и снова промойте водой, как описано выше. Мазки должны были стать почти черными. Если нет, возможно, йод испортился или вы нанесли его не на ту сторону предметного стекла.
  • После ополаскивания водой осторожной струей из пипетки пастера промойте мазки средством для обесцвечивания по Граму. Сначала цвет должен соскользнуть. Продолжайте полоскание, пока белье не станет бесцветным,
    затем снова промойте водой.
  • Залейте слайд сафранином Грама на 60 секунд. с последующим ополаскиванием водой. На этом этапе мазки грамположительных культур должны быть окрашены почти в черный цвет, а мазки грамотрицательных культур должны быть окрашены от розового до красного.Но чтобы быть уверенным, вы должны наблюдать их в микроскоп.
  • Промокните мазок, чтобы удалить излишки воды, используя впитывающую бумагу или бумажное полотенце. Не вытирайте мазки, иначе их можно стереть. Дайте высохнуть на воздухе.

Как испортить окраску по Граму

  • Запутайте мазок, чтобы начать с
  • Нанесите морилку на изнаночную сторону предметного стекла
  • Окрашивание или неполное смывание мазка
  • Дайте пятну высохнуть перед полосканием
  • Забыть обесцвечивать или не полностью обесцвечивать
  • Сотрите материал при промокании

Наблюдение за окрашиванием по Граму под микроскопом

Мы используем светлопольную микроскопию для наблюдения пятен по Граму.Хороший подход к наблюдению за любым мазком очень мелких объектов — исследовать его при малом увеличении (окончательное 40-кратное увеличение).
ориентироваться. После фокусировки можно работать до 100x, 400x и, наконец, с масляной иммерсией на большой мощности (обычно 1000x). Погружение
масло наносится прямо на мазок. Кстати, фокусные расстояния линз с высокой сухой и масляной иммерсией меньше
чем толщина слайда. Мазок должен быть вверх, иначе фокусировка будет невозможна. Верх слайда можно определить
нащупав вытравленный кружок в нижней части слайда.

При малых увеличениях материал, окрашенный по Граму, выглядит на предметном стекле как грязь. Для того, чтобы
чтобы увидеть хоть какие-то детали. Бактерии часто концентрируются в кольце вокруг исходного мазка. Масляная иммерсия в светлом поле
микроскопия необходима, чтобы увидеть неискаженное изображение любого непосредственно окрашенного бактериального мазка. Грамм отрицательный или положительный
фенотип не может быть подтвержден с уверенностью, используя только сухое увеличение, поскольку типичные клетки имеют размер полмикрона.
в диаметре меньше, чем лучшее разрешение высокосухого объектива.Фазовый контраст или просмотр темного поля улучшают
разрешение, но оба искажают цвет. Большое сухое увеличение искажает как форму, так и цвет.

После нанесения иммерсионного масла на предметное стекло высокосохнущая (40x) линза не может
можно использовать снова, если масло не будет удалено. Слайды обычно промокают до
удалите излишки масла, затем несколько раз окуните в ксилол, чтобы растворить
масляную пленку и сушку на воздухе в вытяжном шкафу.

верх

Непрямое (отрицательное) окрашивание

Кислый краситель нигрозин может использоваться для визуализации капсулы или оболочки, окружающей некоторые бактерии в процессе.
называется отрицательным окрашиванием.Капсулы состоят в основном из полисахаридов или гликопротеинов и имеют студенистую форму.
в текстуре. Они легко разрушаются при нагревании, поэтому методы прямого окрашивания использовать нельзя. В целом,
размер и форма микроорганизмов часто меньше искажаются при процедурах непрямого окрашивания, особенно при взятии проб
из бульонной культуры. Поэтому отрицательное окрашивание полезно всякий раз, когда морфология отдельных бактерий
вопрос. Морфология часто может быть определена с уверенностью только с помощью высокосухой линзы.Считайте, что эта процедура
не обязательно убивает организм, поэтому будьте осторожны.

  • После приготовления чистого обезжиренного предметного стекла небольшая капля нигрозина смешивается с небольшой каплей бульона.
    культуры или с количеством сухого материала.
  • Капля распространяется по слайду, используя край другого слайда в качестве распределителя. Эта же процедура используется
    на мазки крови.

После сушки на воздухе пятно исследуют с помощью высокосухой линзы или, при желании, с помощью масляной иммерсии.Мазок будет максимально плотным
где краситель нигрозин был нанесен на предметное стекло. Где-то на конусе копья плотность будет идеальной. В
фон должен быть серо-голубым. Бактерии будут очевидны по отсутствию какого-либо цвета.

верх

Окрашивание спор

Следующая модификация метода Виртца, описанная ниже, по нашему опыту оказалась эффективной и беспроблемной.
Однако вас предупреждают, что цвет может потускнеть через несколько дней.В результате получается нежное сочетание зеленого
и красный, который легко распознается при оптимальном освещении. *** ВНИМАНИЕ *** Краситель малахитовый зеленый токсичен и не может дышать.
испарений или контакт с кожей могут быть опасными. Эту процедуру следует проводить в вытяжном шкафу. Подставка, горелка,
красители и пипетки будут доступны в вытяжках. Процедура грязная — наденьте лабораторный халат или старую одежду.

  • Мазок готовится и фиксируется за 20 проходов через пламя.
  • Мазок помещают на экран над умеренным пламенем горелки Бунзена.
  • Обильное количество насыщенного водного раствора малахитового зеленого наносится на предметное стекло и оставляется на 10 минут.
    до 20 минут. В идеале тепло поддерживают так, чтобы краситель почти не запаривался, то есть беловатые пары еле выделялись.
    видимый. Краситель нужно добавлять, чтобы жидкость не пересыхала.
  • После охлаждения предметное стекло ополаскивают водопроводной водой, чтобы удалить излишки пятна.
  • Затем предметное стекло контрастно окрашивают в течение минуты в 0,25% водном сафранине.Затем предметное стекло ополаскивают, промокают и
    сушеные.

Споры окрашиваются в светло-зеленый цвет, а остальные клетки окрашиваются в розовый цвет. Лучше всего видны споры при погружении в масло.
микроскопия. Часто цвета не очень яркие, поэтому необходимо, чтобы микроскоп был хорошо совмещен с
оптимальный контраст и освещение. Сразу же сделайте заметки о цвете, так как через несколько дней зеленый цвет может потускнеть.

верх

Наблюдения за живыми бактериями

Иногда результаты анализа ухудшаются из-за того, что в среде вместо этого растет контаминирующий организм.
предполагаемого бактериального изолята.Для быстрой проверки соответствия морфологии клеток культуре.
из которого был взят посевной материал, можно приготовить влажный образец и исследовать его в темном поле и / или на фазовом контрасте.
Если присутствуют, эндоспоры часто видны в фазовом контрасте, что позволяет избежать окрашивания спор.

Очень часто для идентификации неизвестного организма требуется знание его подвижности, то есть его
возможность поступательного движения. Результаты инкубации на подвижном агаре могут быть трудными для интерпретации, частично
для аэробных бактерий, которые плохо растут глубоко в агаре.Хорошая быстрая проверка на моторику — это осмотр очень
молодая культура методом висячей капли. Молодая культура — это бульонная культура, привитая накануне вечером,
или бульонная культура, которую утром разбавляли в 10 раз, инкубировали и исследовали днем. Висит
Капельная культура готовится, помещая очень маленькую каплю среды на покровное стекло, а затем переворачивая покровное стекло.
слайд с вдавлением так, чтобы дно капли не касалось самого слайда.Можно использовать вазелин
при необходимости сделать герметичную камеру.

Висящие капли можно исследовать с использованием любых линз объектива, хотя
глубина падения предел может быть 100x. Изогнутый ползун с углублением искажает эффекты фазового контраста,
но темное поле может работать, и его будет достаточно для обнаружения движения. Все живые бактерии перемещаются по броуновскому (молекулярному)
движение со скоростью вибрации, которая обратно пропорциональна размеру ячейки.Быстрое броуновское движение — это
общая характеристика неподвижных кокков, таких как стафилококк, стрептококк или микрококк. Однако некоторые бактерии
бичеваются, а также демонстрируют поступательное движение. По-настоящему подвижные организмы будут мчаться по микроскопу
поле. Ищите определенное направленное движение, кувырок и движение против течения.

Осторожно утилизируйте влажные образцы, так как бактерии будут жизнеспособны.

Мазок — обзор | Темы ScienceDirect

Фиксирующие средства и пятна

Высушенные на воздухе мазки окрашивают методом Романовского или одним из множества вариантов.Автор предпочитает имеющиеся в продаже морилки Diff-Quik. Это пятно представляет собой трехэтапный процесс, состоящий из метилового спирта, который является фиксатором, за которым следует эозин Y, а затем лазурный A. Мазки фиксируются распылением одним из ряда имеющихся в продаже продуктов или фиксируются влажным способом в 95% этил, метил. , или изопропиловый спирт окрашиваются красителем Папаниколау или его модификациями. Как отмечалось в отношении быстрого окрашивания по Папаниколау, все мазки можно сушить на воздухе. 46 При использовании фиксаторов в виде спреев важно дать этим мазкам высохнуть не менее чем за 1 час до окрашивания.

Мазки, окрашиваемые быстрым гематоксилином и эозином, получают выгоду от немедленной фиксации путем погружения на несколько секунд в равные части 50% этилового спирта и 10% нейтрального забуференного формалина. Эта кратковременная фиксация также улучшает окрашивание обычных замороженных срезов. При окрашивании методом быстрого гематоксилина и эозина на этапах полоскания используйте горячую (водопроводную, а не кипящую) воду. Это улучшает общее качество слайдов и делает детали ячеек более резкими.

Цитоспиновые препараты для иммуногистохимии получают промыванием либо отдельного аспирата от поражения, либо части аспирационной биопсии сбалансированным солевым раствором.Отдельный аспират для цитоспинов предпочтительнее. Цитоспины могут быть высушены на воздухе или фиксированы в 95% этиловом спирте. Автор предпочитает сушку на воздухе. Прямые мазки или цитоспины, высушенные на воздухе или фиксированные для использования в иммуногистохимии, могут храниться в морозильной камере до 4 недель. Образцы для аспирации, фиксированные или глубоко замороженные, также подходят для молекулярных диагностических методов и могут храниться, как описано выше.

Как личные предпочтения, так и опыт, кажется, диктуют, какое пятно или какие пятна будут использоваться для мазков при аспирационной биопсии.Цитопатологи, ориентированные на хирургическую патологию, могут предпочесть быстрое окрашивание гематоксилином и эозином. Те, у кого есть опыт в цитопатологии, чаще всего предпочитают окраску по Папаниколау. Людям, имеющим гематологический опыт или прошедшим обучение в клинике аспирационной биопсии в Каролинске или в других скандинавских странах, по-видимому, нравятся окраски по Романовскому, Мэй-Грюнвальд-Гимза, прямое окрашивание Гимзы Райта или, в США, Diff-Quik. 80,81 Основное пятно, обнаруженное Романовским, — лазурное A.Это соединение нестабильно и постоянно окисляется до лазурного B, который и является веществом для окрашивания. Этот тип окрашивания приводит к метахромазии любых стромальных элементов, присутствующих с эпителиальными или другими типами клеток, видимыми в отличие от этой стромы. В дополнение к этой резко отличительной метахромазии, основным преимуществом этого окрашивания является его быстрота, которая может привести к немедленной интерпретации после аспирационной биопсии. Также можно проверить качество аспирата и мазков.При необходимости можно получить повторную аспирационную биопсию как для постановки диагноза, так и для специальных исследований, как того требует предварительная оценка.

Процедура окрашивания Diff-Quik состоит из трех этапов. Для получения окрашенного этим пятном мазка аспирации требуется менее 20 секунд. В таблице 20.1 представлено общее сравнение свойств мазков, высушенных на воздухе, и мазков, зафиксированных влажным способом. В таблице 20.2 представлены особенности, подчеркнутые красителями по Романовскому, по сравнению с обычным окрашиванием по Папаниколау, как это было первоначально обозначено Ореллом и его коллегами. 80

По опыту автора, обычное окрашивание по Папаниколау приводит к некоторой значительной потере клеток из мазков. Частично это происходит во время фиксации, даже при использовании фиксаторов в виде спреев, а дополнительные клетки теряются во время процедуры окрашивания. В 1995 году Янг разработал очень быстрое окрашивание по Папаниколау. 46 Для этого метода окрашивания мазки аспирационной биопсии могут высохнуть на воздухе. Затем мазки регидратируют физиологическим раствором в качестве первого шага процедуры окрашивания.Далее идет фиксация спиртовым формалином, смесью 65% этанола и 4% формалина. Подробности этого метода окрашивания приведены в Приложении. Общее время фиксации и окрашивания обычно составляет всего 90 секунд. В некоторых случаях было полезно провести быстрое окрашивание мазков по Папаниколау для сравнения цитологических характеристик с мазками, окрашенными по методу Дифф-Квика, высушенными на воздухе (рис. 20.3 и 20.4). Проблемные случаи могут быть решены быстрее. Дополнительным преимуществом является то, что клиницисты, выполняющие свои собственные аспирационные биопсии, не должны учитывать детали фиксации мазков.Скорее, лаборатория может решить, какие мазки окрашивать этим быстрым методом Папаниколау, а какие окрашивать другими красителями.

Giemsa Stain — обзор

Идентификация простейших чаще всего производится по морфологическому внешнему виду с использованием красителей H&E и, в частности, красителей Giemsa. Наличие антисывороток против таких организмов, как энтамоеба, токсоплазма и лейшмания, значительно облегчило диагностику в сложных случаях (рис. 17.10).

Protozoa

Entamoeba histolytica , организм, вызывающий амебный колит или дизентерию, можно обнаружить в язвах, возникающих в инфицированной толстой кишке, и в амебных абсцессах печени.Трофозоит (взрослая форма) имеет размеры 15–50 мкм, содержит небольшое ядро ​​и пенистую цитоплазму, содержащую проглоченные эритроциты и остатки лейкоцитов. Они могут быть замечены в грануляционной ткани внутри язв или в слизистой оболочке просвета, покрывающей нормальную слизистую оболочку, и являются PAS-положительными; кратковременное контрастное окрашивание в 1% водном растворе метанила желтого подчеркивает проглоченные эритроциты.

Toxoplasma gondii , часто встречающийся организм, который распространяется в наполнителе кошачьего туалета, вызывает острую лимфаденопатию, которая часто носит субклинический характер.Пораженные узлы показывают неспецифические изменения и отсутствие организмов. У больных СПИДом и других пациентов с ослабленным иммунитетом это простейшее вызывает системные заболевания, включая менингоэнцефалит, при котором в некротической ткани мозга можно увидеть инцистированные брадизоиты и свободные тахизоиты. Кисты также встречаются в других тканях, таких как сердечная мышца, и имеют размер до 40 мкм с тахизоитами 4–6 мкм, что можно увидеть на H&E. Также можно использовать окраску по Гимзе, но рекомендуется использование меченой специфической антисыворотки.

Leishmania tropica передается при укусе москитов и вызывает хроническое воспалительное заболевание кожи, которое иногда называют кожным лейшманиозом.Инъецированные формы паразитов (2 мкм) или амастиготы обнаруживаются в большом количестве в цитоплазме множества опухших гистиоцитов, которые собираются в ранних очагах поражения дермы. Родственный организм, L. donovani , вызывает системную висцеральную инфекцию, кала-азар, при которой микроорганизмы обнаруживаются в гистиоцитах в селезенке, лимфатических узлах, печени и костном мозге. Микроорганизмы гематоксифильны и могут быть выделены красителем Гимза.

Giardia duodenalis (lamblia) — жгутиковые простейшие, которые попадают в организм в форме цисты из питьевой воды с фекальными загрязнениями; трофозоиты мигрируют в двенадцатиперстную кишку, где они могут вызвать тяжелую диарею и мальабсорбцию.Эти организмы можно легко пропустить при окрашивании H&E, где они выглядят как эозинофильные серповидные хлопья с нечеткими ядрами, лежащими на слизистой оболочке кишечника, которые могут иметь мало признаков воспаления. При наблюдении в свежем аспирате двенадцатиперстной кишки, окрашенном по Гимзе, они выглядят как змеевидные, размером 11–18 мкм, двуядерные и со слабыми концевыми жгутиками.

Trichomonas vaginalis — это похожее на жгутик простейшее, наиболее часто встречающееся при окраске по Папаниколау. Воспалительные клетки и плоские клетки с легкой степенью диспластичности часто сопровождают этого паразита, поскольку он вызывает цервицит у женщин и уретрит у обоих полов.

Cryptosporidium является одним из группы простейших (включая Isospora и Microsporidium ), вызывающих тяжелые и непрекращающиеся вспышки диареи среди больных СПИДом. Криптоспоридиальные гаметы видны на окрашивании H&E в виде синих точек, расположенных вдоль поверхности слизистой оболочки. Зрелые кисты выделяются в фекалии и являются кислотоустойчивыми при окраске ZN мазков из фекалий.

Отрицательное окрашивание и криоотрицательное окрашивание: применение в биологии и медицине

1 Введение

Базовый метод отрицательного окрашивания выдержал испытание временем с момента его внедрения в качестве лабораторной процедуры в 1959 году Бреннером и Хорном [ 1 ], как недавно полностью признали Харрис и Манн [ 2 ] после смерти Роберта (Боба) У.Хорна в ноябре 2010 года. С вариациями этот метод продолжает широко применяться для тонкого распределения биологических образцов, начиная от вирусов и заканчивая отдельными макромолекулами и макромолекулярными сборками, фракциями субклеточных мембран, липидными суспензиями, взаимодействиями токсин-липид / мембрана и т. Д. фибриллогенез ряда амилоид-образующих пептидов и белков и коллагена можно легко контролировать с помощью отрицательного окрашивания. Отрицательное окрашивание также может применяться к клеткам и субклеточным фракциям, в которых материал достаточно тонкий, проницаемый или физически лизированный, в частности, для выявления структур цитоскелета, которые затем доступны для иммунной метки.Этот метод легко распространяется на нанотехнологию, нанобиотехнологию и науку о полимерах для оценки размера и структуры частиц [ 3 ]. В диагностической вирусологии отрицательное окрашивание внесло значительный вклад в ранний период, который продолжается и по сей день, хотя и в меньшей степени, наряду с недавно введенными молекулярными и иммунологическими анализами, см. Mast and Demeestere [ 4 ]. Для быстрой оценки биологических экстрактов и очищенных белков, часто образующихся при экспрессии бактерий, отрицательное окрашивание может предоставить полезную информацию за считанные минуты.Это относится, прежде всего, к немедленному указанию чистоты образца в дополнение к состоянию диссоциации и агрегации водного образца. Для тех, кто желает перенести материал образца для криоэлектронной микроскопии с более высоким разрешением, либо в неокрашенном застеклованном состоянии, либо в виде криоотрицательно окрашенных образцов, обычное отрицательное окрашивание может предоставить ценную информацию, позволяющую сэкономить время, как, впрочем, и наряду с 2D- или 3D-кристаллизацией. исследования. Несмотря на ограниченное разрешение, достижимое для высушенных на воздухе отрицательно окрашенных образцов (обычно порядка 2 нм), несколько групп продолжают использовать этот подход для создания реконструкций трехмерных изображений с низким разрешением с помощью анализа отдельных частиц, в некоторых случаях с стыковкой с более высоким разрешением. структуры из ЯМР и рентгеновской кристаллографии [ 5 8 ].Криоотрицательное окрашивание [ 9 ] позволяет достичь значительно более высокого разрешения порядка 1 нм. Общая тема была недавно подробно рассмотрена де Карло и Харрисом [ 10 ].
Представляет некоторый технический интерес кратко рассмотреть происхождение и модификации процедур углеродной поддерживающей пленки для негативного окрашивания, которые произошли за эти годы, и то, как они влияют на современные процедуры. Предварительно сформированные углеродные подложки, поддерживающие пленки из углепластика или дырчатые углеродные пленки на решетках нашли широкое применение для тонкого растекания, адсорбции и негативного окрашивания биологических образцов из капель на Parafilm или из микроспрея / распылителя с образцом и негативом. пятно предварительно смешано.Универсальная капельная техника, которую отдают предпочтение авторам, была впервые представлена ​​в 1965 году Эннио-Лучио Бенедетти во время его исследований мембран клеток печени (см. Подзаголовок 3.1.1). Однако альтернативный подход был предложен в 1968 году покойным Робином Валентайном и его коллегами [ 11 ], в котором углеродная пленка может отделяться от слюды, плавая непосредственно на поверхности раствора биологического образца в небольшой чашке Петри. , микролунка или капля на Parafilm с последующей адсорбцией образца на углеродной пленке.Затем его можно перенести на сетки, промыть и при необходимости окрасить. Кроме того, эту процедуру можно легко расширить для изготовления образцов между углеродным сэндвичем на решетках. Вариант, предложенный Хорном и Паскуали-Ронкетти [ 12 ], названный процедурой отрицательной окрашивающей углеродной пленки (NS-CF), изменил порядок осаждения углерода, так как это было выполнено непосредственно на образце, уже нанесенном в присутствии молибдат аммония и сушат на воздухе на поверхности слюды с последующим высвобождением углеродной пленки + адсорбированного образца на поверхность второго раствора отрицательного красителя.Явным преимуществом этой процедуры было получение двумерных массивов и двумерных кристаллов (даже трехмерных микрокристаллов), когда сушка образцов вируса и белка на слюде выполняется в присутствии молибдата аммония + полиэтиленгликоля (ПЭГ). Удаление глицерина из образцов в вакууме также может быть выполнено с использованием этого метода, и его можно расширить как процедуру «мокрого расщепления» для клеточных образцов, которые были связаны с слюдой, обработанной Alcian blue [ 13 ]. Распространение негативного окрашивания на дырявые углеродные поддерживающие пленки, где биологический материал свободно подвешивается через отверстия, поддерживаясь только окружающим негативным пятном и защитным углеводом, создает условия, при которых материал не адсорбируется на углероде и тем самым предотвращает возможное структурное искажение, вызванное адсорбцией. и уплощение.По сути, то же самое относится и к использованию пленок с дырчатой ​​углеродной подложкой для криоотрицательного окрашивания. В данном случае включение ПЭГ в процедуру криоотрицательного окрашивания молибдатом аммония также способствует формированию двумерных массивов до стеклования, указывая на то, что силы на границе раздела жидкость-воздух участвуют в обоих методах.
Важным аспектом отрицательного окрашивания углеродных поддерживающих пленок, который необходимо расширить в контексте недавних и более ранних исследований, являются возможные преимущества, которые могут быть получены от адсорбции и отрицательного окрашивания образцов на одном слое углерода по сравнению с углеродным сэндвичем. с образцом и слоем пятна, зажатыми между двумя слоями.Отрицательное окрашивание биологических образцов на одном слое углерода всегда показывало области различной глубины окрашивания, в основном от почти неокрашенных областей до областей с чрезмерной глубиной окрашивания. Более тонкие участки пятен с частичной глубиной могут создавать изображения только из нижней части исследуемых структур, а чрезмерная глубина пятен скроет структурные детали. Чтобы создать более равномерное распространение пятен, было введено включение дисахарида трегалозы [ 14 ], и проблема почти полностью решается за счет распределения и отрицательного окрашивания образцов первоначально в виде тонкой водной пленки в присутствии трегалозы по всей поверхности. отверстия в дырчатых углеродных опорных пленках с последующей сушкой на воздухе (см. субпозицию 3.1.2). Этот последний подход по существу эквивалентен процедуре приготовления неокрашенных или отрицательно окрашенных замороженных гидратированных / стекловидных образцов, поскольку смесь отрицательного красителя и трегалозы представляет собой высушенный, но тонкий слой стекловидного пятна и сахара через отверстия.
Создание двойного углеродного слоя с образцом и пятном, захваченным между ними, было встречено и использовалось много лет назад, но в то время, как правило, считалось неудовлетворительным из-за вероятности значительного уплощения / искажения образца.Однако для жестких образцов или образцов, стабилизированных глутаральдегидом, этот подход стал применяться в последнее время как для отрицательного окрашивания, высушенного на воздухе, так и для крио-отрицательного окрашивания (см. Субпозицию 3.1.4). Преимущество здесь заключается в том, что при реконструкциях одиночных частиц имеется равномерное покрытие пятном вокруг захваченных частиц образца. Таким образом, оба подхода (т.е. однослойные и двухслойные углеродные носители) в настоящее время используются для исследований отрицательного окрашивания биологических структур; каждый может утверждать, что имеет определенные преимущества и недостатки.Совершенно очевидно, что каждая лаборатория, выполняющая отрицательное окрашивание, будет использовать несколько разные внутренние протоколы; все они будут стандартизированы на местном уровне, что позволит генерировать воспроизводимые данные.
Используемая в настоящее время методология криоотрицательного окрашивания разработана в результате продуктивного сотрудничества между одним из нас (JRH) и криоэлектронными микроскопистами из Лозанны Марком Адрианом и Жаком Дюбоше (см. Адриан и др. [ 9 ]) в попытка обеспечить лучшую сохранность образцов и разрешение изображения по сравнению с традиционным методом негативного окрашивания с образцами, высушенными на воздухе.Эта тема была кратко рассмотрена Харрисом и Адрианом [ 15 ], а также Харрисом и др. [ 16 ], а совсем недавно де Карло и Харрис [ 10 ]. С методологической точки зрения, этот метод подготовки образца очень похож на метод тонкопленочного стеклования неокрашенных образцов [ 17 ], за исключением того, что есть дополнительный этап, короткое время контакта между биологическим образцом и отрицательное окрашивание перед погружением в заморозку (см. субпозицию 3.1.8). В результате биологический образец попадает в тонкий застеклованный раствор молибдата аммония с высокой концентрацией, по существу, при концентрации насыщения (~ 0,8 М). Однако, если эта криометодология аналогична первоначальной процедуре быстрой окунания витрификации [ 17 ], результаты, полученные с помощью этого метода криоотрицательного окрашивания, будут совершенно другими, на наш взгляд исключительными и полностью подтвержденными недавними приложениями [ 18 20 ].
Недавние разработки / варианты метода отрицательного окрашивания немногочисленны, хотя Чжан и его коллеги внесли значительный вклад в понимание структуры липопротеинов, используя оптимизированный протокол отрицательного окрашивания [ 21 ], расширяющий подход, представленный Ohi et al. .[ 22 ]. Амбициозная попытка стандартизировать и улучшить отрицательное окрашивание для ТЕА и STEM недавно была предпринята Kemmerling et al. [ 23 ], используя роботизированное автоматизированное оборудование с микрофлюидным диализом для обессоливания и смешивания биологических образцов с отрицательным окрашиванием. Маловероятно, что это оборудование и его подробная последовательность сразу станут широко доступными, но оно дает убедительные доказательства того, что дальнейшие технические улучшения возможны.
Альтернативный метод криоотрицательного окрашивания углеродного сэндвича с использованием уранилформиата и глицерина был разработан Старком и его коллегами [ 24 ], как полностью представлено Сандерсом и Голасом [ 25 ].Существенная разница в том, что образец, отрицательно окрашенный с низкой концентрацией красителя, ненадолго сушат на воздухе перед замораживанием в жидком азоте для исследования ЭМ криоотрицательного окрашивания. Таким образом, этот модифицированный метод криоотрицательного окрашивания не является прямым эквивалентом метода дырчатого углерода Адриана [ 9 ], который имеет более близкую параллель с традиционной процедурой стеклования неокрашенных образцов.
Хотя некоторые из включенных здесь методов негативного окрашивания были представлены одним из нас (JRH) в Королевском микроскопическом справочнике [ 26 ] и в двух предыдущих изданиях этой книги (1999 и 2007), в этом третьем издании некоторые Были предприняты усилия, чтобы обновить эти подходы и представить методы в новом свете.Тем не менее, все методы, как ранее, так и в настоящее время задокументированы, остаются пригодными для использования и воспроизводимыми. Кроме того, в подзаголовке 4 будут представлены несколько новых примеров ЭМ-данных, полученных при использовании методов отрицательного окрашивания, но примеры, использованные в предыдущих изданиях, остаются в силе.

3 Методы

Ниже будут представлены протоколы для отрицательного окрашивания с использованием процедуры одной капли, применяемой к образцам, адсорбированным на сплошной углеродной пленке или распределенным по маленьким отверстиям дырявой / перфорированной углеродной пленки [ 27 ].Также будут представлены методы плавающего и углеродного сэндвича, но метод распыления капель не будет включен, в первую очередь из-за современных соображений безопасности. Хотя все различные подходы могут дать удовлетворительные отрицательно окрашенные образцы для исследования ПЭМ, автор считает, что использование дырчатых углеродных пленок с молибдатом-трегалозой аммония в качестве отрицательного окрашивания, хотя технически немного сложнее, предпочтительнее для детального изучения. молекулярно-отрицательные исследования окрашивания.Для рутинных исследований обычно достаточно отрицательного окрашивания уранилацетатом на сплошных углеродных опорных пленках.
Будет дан метод негативной окрашивающей углеродной пленки (NS-CF) для 2D-кристаллизации или белков и вирусов [ 26 , 35 ], для случайно диспергированных молекул и расщепления клеток и органелл [ 10 ]. Кроме того, будет дано применение процедуры отрицательного окрашивания по каплям для получения образцов, меченных антителами или аффинностью, вместе с комментариями о возможностях экспериментов с динамическим отрицательным окрашиванием (где период времени обычно находится в диапазоне от нескольких минут до часов, а не миллисекунд или секунд).Наконец, будут представлены две процедуры приготовления криоотрицательно окрашенных образцов [ 9 , 24 ].

Несмотря на процедурные списки, приведенные ниже, пользователь должен, имея некоторый ограниченный опыт, быть готовым свободно вводить небольшие технические изменения в соответствии с любыми местными требованиями, определяемыми биологическим образцом, имеющимся оборудованием и целями любого отдельного исследования. Таким образом, общая научная / техническая осведомленность о том, что улучшения на уровне сетки образцов можно постоянно искать и включать, весьма желательна.

3.1 Метод отрицательного окрашивания одной каплей

Эта общая и универсальная процедура [ 26 ] применима к биологическим образцам, адсорбированным на сплошных углеродных пленках и свободно распространяющимся по отверстиям дырявых углеродных пленок. С небольшими изменениями он применим к экспериментам с иммуноотрицательным окрашиванием и динамическим отрицательным окрашиванием (см. Ниже, подзаголовки 3.1.6 и 3.1.7).

3.1.1 Обычное негативное окрашивание сплошных углеродных пленок [

26 , 36 ]

1.

Отрежьте кусок парафильма от рулона (длина зависит от количества образцов и решеток, которые необходимо подготовить) так, чтобы отдельные образцы можно было расположить на расстоянии прибл. 1,5 см, как показано на рис. 2.

Рис. 2

Типичный пример размещения материала для процедуры одиночного отрицательного окрашивания. Количество промывных капель варьируется в зависимости от буфера и концентрации соли в образце.

2.

Поместите Parafilm, обработанный парафином, на чистую поверхность стола и перед удалением бумажного покрытия произведите ряд параллельных линий, нанесенных тупым предметом поперек бумаги.Затем удалите бумажную накладку, оставив пленку Parafilm неплотно прикрепленной к поверхности стола.

3.

Поместите 20 мкл капель суспензии образца, дистиллированной воды (или разбавленного, например, 5 мМ буферного раствора) и раствора отрицательного окрашивания на Parafilm, как показано на рис. 2. Количество капель воды может варьироваться. в зависимости от концентрации реагента, удаляемого из образца, при условии, что каждая последующая промывка может привести к дополнительному разрушению хрупкой углеродной поддерживающей пленки.(В общем, лучше не пытаться приготовить более 6–8 сеток образцов за одну партию, если это не является абсолютно необходимым).

4.

С помощью пары изогнутых пинцетов возьмите отдельную решетку для образцов, покрытую тонкой непрерывной углеродной поддерживающей пленкой. (Кратковременная обработка тлеющим разрядом должна быть применена заранее, чтобы повысить гидрофильность углеродной поверхности и тем самым улучшить растекание образца и пятна). Прикоснитесь угольной поверхностью к капле образца. По истечении периода времени от 5 до 60 с (см. Примечание 1) удалите почти всю жидкость, осторожно прикоснувшись краем сетки к клину фильтровальной бумаги.

5.

Прежде чем образец успеет высохнуть, промойте адсорбированный образец одной или несколькими каплями дистиллированной воды и каждый раз осторожно сливайте лишнюю воду с сетки, как на этапе 4.

6.

Прикоснитесь к поверхности сетки к капле негативного пятна и аналогичным образом удалите излишки жидкости. Затем дайте тонкой пленке образца + отрицательного пятна высохнуть на воздухе перед тем, как поместить решетку в подходящий контейнер (чашку Петри или имеющийся в продаже ящик для хранения решеток; см. Примечание 2).

7.

После сушки при комнатной температуре сетки сразу же готовы для исследования ПЭМ, либо в условиях обычной дозы электронов при температуре окружающей среды, либо в условиях низкой дозы электронов при температуре окружающей среды или после охлаждения образца в ПЭМ (например, примерно до -180 ° C; см. Примечание 3).

3.1.2 Отрицательное окрашивание на углеродных поддерживающих пленках с отверстиями

Этот вариант метода капельного отрицательного окрашивания особенно полезен для подробных исследований образцов, которые уже были оценены обычным негативным окрашиванием на сплошных углеродных поддерживающих пленках и оправдывают большее количество раз. подробное исследование в условиях, исключающих адсорбцию углерода и сплющивание образца.Следует следовать протоколу, приведенному в субпозиции 3.1.1, с включением следующих вариантов, как описано Харрисом и Шеффлером [ 27 ]:

1.

Для дырчатых углеродных пленок тлеющий разряд обычно не требуется, когда Также был нанесен тонкий микрокристаллический слой золота или металлического палладия.

2.

Необходимо использовать одну из комбинаций отрицательных красителей и углеводов (например, 5% молибдата аммония или фосфовольфрамата натрия + 0.1% (мас. / Об.) Трегалозы; см. примечание 4), поскольку пленка образца и пятна, высушенная на воздухе без подложки, очень легко разрушается. Эта ситуация значительно улучшается за счет присутствия углеводов, но концентрации трегалозы, превышающие 1,0% мас. / Об., Приводят к быстрому повреждению электронного луча, если не используются условия с низкой дозой электронов.

3.

Для образцов, приготовленных через дырчатые углеродные пленки, обычно желательны концентрации в образцах 1,0–2,0 мг / мл белка, так как большее количество свободного материала теряется из отверстий во время стадий промывки и окрашивания.Однако биологический материал часто задерживается на границе раздела жидкость-воздух на стороне сетки, противоположной месту касания фильтровальной бумаги, из-за сил поверхностного натяжения.

Только золотые участники могут продолжить чтение. Войдите или зарегистрируйтесь, чтобы продолжить

Связанные

Премиум-темы WordPress от UFO Themes

Тема WordPress от UFO themes

Распыление пятен, не требующих протирания, может обеспечить лучшие результаты

Наиболее распространенный метод окрашивания — это нанесение влажного покрытия и удаление всего или большей части излишков до высыхания пятна.Пятно можно нанести любым инструментом — тряпкой, кистью или пульверизатором — можно окунуть, а затем протереть.

Менее распространенный метод нанесения морилки — это распылить его на дерево и оставить его. Если не протирать, можно достичь трех основных целей:

  • Более равномерная окраска мелкозернистых пятнистых пород древесины, таких как вишня, береза, клен и сосна
  • Равномерная окраска фона для всех пород древесины
  • Привести цвет заболони (или более светлой древесины) ближе к цвету сердцевины древесины

Пятна, используемые для этой техники, называются пятнами, наносимыми распылением / не протирать.

Распыляя пятно, не вытирая излишки, вы наносите равномерное количество красителя повсюду. Таким образом, пятнистость в древесине с плотной структурой практически полностью устранена. Но, не стирая лишнее, вы также уменьшаете или даже устраняете четкость зерна. Это вытирание оставляет больше красителя на зернах и пятнистых участках.

Если вы добились полного развития цвета с помощью простых пятен, которые не вытираете, вы обнаружите, что они наиболее эффективны на древесине с плотным волокном, которая имеет тенденцию к пятнам.Но на мелкозернистой древесине они размывают зерно.

Чтобы добиться четкости текстуры и ровной окраски фона на древесине с открытой структурой, нанесите на пятно, которое нельзя протирать, тонкую пленку, затем протрите пятно и сотрите излишки. В зерне останется краситель, который подчеркнет его.

Пигмент и краситель

При выборе морилки важно знать два типа красителей: пигмент и краситель. Пигмент — это твердые цветные частицы, которые оседают на дно банки и должны быть перемешаны до состояния суспензии.Краситель растворяется в растворителе (или воде) и не оседает.

Пигмент — это краситель, который сложнее использовать в качестве морилки, которую нельзя вытирать, поскольку он может испачкать древесину, если нанести слишком много. Краситель обеспечивает большую прозрачность. Некоторые коммерческие пятна, которые нельзя вытирать, содержат и то, и другое.

Современные технологии измельчения позволили измельчить пигмент настолько тонко, что он во многом похож на краситель. Если вы покупаете пятна, не требующие протирания, у коммерческого поставщика, вы сможете получить почти почти окрашенный вид с помощью пигмента.

Преимущество пигмента перед красителем в том, что он намного меньше выцветает. Все красители выгорают под прямыми солнечными лучами даже через окно, что бы ни заявлял производитель. Некоторые красители просто блекнут не так быстро. Но на предметах, сделанных в течение многих лет, единственный способ избежать выцветания — не допускать попадания прямых солнечных лучей.

Разбавление

Любое пятно можно превратить в пятно, которое невозможно вытирать, если разбавить его. Даже пятна, продаваемые как пятна, которые нельзя стирать, можно разбавить еще больше для лучшего контроля. Хитрость заключается в том, чтобы разбавить пятно настолько, чтобы можно было получить цвет за несколько проходов.Если вы попытаетесь получить желаемый цвет за слишком мало проходов, вы получите неровные полосы.

Также при разбавлении пятна важно выбрать разбавитель, чтобы получить оптимальную скорость высыхания. Если пятно сохнет слишком медленно, на нем могут появиться крапинки — скопиться в более толстые пятна и гребни. Если оно высыхает слишком быстро, будет сложно равномерно нанести пятно без нахлеста.

Пистолет-распылитель

Вы можете использовать любой тип распылительной системы для нанесения пятен, не требующих протирания, но гораздо легче добиться равномерного результата с помощью мягкого распылителя HVLP.Также можно использовать безвоздушный и безвоздушный режим. Если вы используете обычный пистолет-распылитель, распыляйте на расстоянии очень широким рисунком.

Независимо от того, какой тип распылительной системы вы используете, очень важно, чтобы пистолет был чистым и правильно отрегулирован. Вы должны получить равномерное распыление по ширине рисунка. Если узор тяжелый посередине или по краям, сохранить равномерность окраски будет невозможно. Вы получите полосу.

Техника распыления

Для получения хороших результатов с пятнами, которые нельзя вытирать, необходимо знать ряд рекомендаций и приемов.К ним относятся движения рук, рук и тела; перекрытие и покрытие коробки.

Движение тела, которое вы используете при нанесении несмываемых пятен, такое же, как и при распылении. Зафиксируйте запястье, локоть, руку и плечо, затем ровными шагами пройдитесь по ширине распыляемого объекта, удерживая пистолет на одинаковом расстоянии.

Не махайте пистолетом и не раскачивайте его вперед и назад. Следите за тем, чтобы рисунок распыления был как можно более постоянным.

Перекрытия могут привести к появлению более темных участков и полос.Чтобы этого избежать, перекрывайте каждый проход на 50 процентов. Начинайте и заканчивайте каждый проход на расстоянии нескольких дюймов от целевого объекта. Первый проход должен быть наполовину на объекте и наполовину выключен. Затем перекрывайте каждый проход на 50 процентов, пока не покроете всю площадь. Наконец, сделайте последний проход наполовину включенным и наполовину выключенным.

Чтобы еще больше уменьшить вероятность появления полос, используйте метод распыления коробчатого покрытия. Поочередно выполняйте проходы между горизонтальным и вертикальным или в одну сторону, а затем на 90 градусов в противоположную сторону после завершения каждого покрытия.Покрытие коробки помогает устранить полосы, вызванные перекрытиями (по сути, за счет маскировки возникающих перекрытий).

Если вы заканчиваете более одного объекта или очень большой объект, подготовьте панель шагов, чтобы вы знали, когда вы достигли желаемого цвета. Панель шага — это либо отдельная панель с целевым цветом для этого шага, либо это панель, разделенная на разделы, где каждый цветовой шаг находится в своем собственном разделе.

Дополнительные сведения

По мере высыхания пятна светлеют.Благодаря методу распыления пятна, которые нельзя вытирать, быстро светлеют. Так что в какой-то момент вам может понадобиться нанести покрытие для мытья посуды, чтобы зафиксировать цвет и посмотреть, что у вас есть. Если краска, покрытая лаком, недостаточно темная, вы можете распылить на нее еще одно пятно, которое не нужно протирать. На этом этапе пятно, которое нельзя вытирать, становится тонером.

Двери с приподнятыми панелями и другие трехмерные объекты бывает трудно окрасить в однородный цвет из-за углублений в профилях. Вместо того, чтобы пытаться распылять эти профили под углом, как вы могли бы сделать с отделкой, распыляйте объект как плоский, держа пистолет-распылитель на равном расстоянии, перемещаясь вперед и назад и перекрывая 50 процентов.

Затем добавьте ступень глазури, называемую заливным глазированием, в вашу процедуру отделки, чтобы добиться окраски углублений даже на плоских поверхностях. После нанесения тонкого слоя или между слоями отделки нанесите на эти углубления глазурь того же цвета, что и несмываемое пятно.

Для успешного распыления пятен, не требующих протирания, требуется практика. Это причина, по которой большинство отделочников предпочитают протирать пятна. Но более элегантные, изысканные и богатые результаты можно получить с помощью пятен, не требующих протирания, так что практика окупается.

Боб Флекснер — автор книг «Понимание отделки древесины» и «Флекснер по отделке».

Эта статья впервые появилась в выпуске за сентябрь 2015 года.

Прямое и непрямое окрашивание | Микробиология | Методы биотехнологии | Ботанические лабораторные эксперименты

Введение в окрашивание
Морфологию бактерий (форму и структуру) можно исследовать двумя способами:

  • Путем наблюдения за живыми неокрашенными организмами (влажное крепление), или
  • Наблюдая за убитыми, окрашенными организмами.

Поскольку бактерии почти бесцветны и поэтому мало контрастируют с
бульон, в котором они суспендированы, их трудно наблюдать при
неокрашенный. Окрашивание микроорганизмов позволяет:

  • Увидеть больший контраст между организмом и фоном
  • Различать различные морфологические типы (по форме, расположению, грампреакции и т. Д.)
  • Осмотрите определенные структуры (жгутики, капсулы, эндоспоры и т. Д.).

Прежде чем окрашивать бактерии, вы должны сначала понять, как «исправить»
организмов на предметное стекло.Если препарат не зафиксировать, организмы будут
смываться с предметного стекла во время окрашивания. Самый простой метод — сушка на воздухе.
и термофиксации. Организмы фиксируются нагреванием, пропуская высушенный на воздухе мазок
организмы через пламя газовой горелки. Тепло коагулирует
белки организмов, заставляя бактерии прилипать к предметному стеклу.

Порядок термофиксации следующий:

  1. Если культура взята из агаризованной среды:
    1. Используя бутылку-капельницу с дистиллированной водой, найденную на стойке для окрашивания,
      поместите ½ капли воды на чистое предметное стекло, прикоснувшись пипеткой к
      горка.
    2. Асептически удалите небольшое количество культуры с поверхности агара.
      и прикоснитесь несколько раз к капле воды, пока она не станет мутной.
    3. Сожгите оставшиеся бактерии с петли. (Если добавлено слишком много культуры
      в воду вы не увидите окрашенных отдельных бактерий.)
    4. Используя петлю, распределите подвеску по всему слайду, чтобы получился
      тонкая пленка.
    5. Дайте этой тонкой суспензии полностью высохнуть на воздухе.
    6. Пропустите слайд (пленкой вверх) через пламя горелки Бунзена.
      3 или 4 раза для термофиксации.

    Осторожно : Слишком много тепла может деформировать организм и, в случае
    Окрашивание по Граму может вызвать грамположительное окрашивание грамотрицательных микроорганизмов.
    Слайд должен быть очень теплым, но не слишком горячим, чтобы удерживать его.

  2. Если организм взят из бульонной культуры:
    1. В асептических условиях поместите 2 или 3 петли культуры на чистое предметное стекло.Не
      используйте воду.
    2. Используя петлю, распределите подвеску по всему слайду, чтобы получился
      тонкая пленка.
    3. Дайте этой тонкой суспензии полностью высохнуть на воздухе.
    4. Пропустить слайд (пленкой вверх) через пламя горелки Бунзена.
      3 или 4 раза для термофиксации.

Чтобы понять, как работает окрашивание, будет полезно знать
немного о физической и химической природе пятен.Пятна обычно представляют собой соли
в котором один из ионов окрашен. (Соль — это соединение, состоящее из
положительно заряженный ион и отрицательно заряженный ион.) Например, краситель
метиленовый синий на самом деле хлорид метиленового синего, который будет диссоциировать
в воде в положительно заряженный ион метиленового синего, который имеет синий цвет, и
отрицательно заряженный хлорид-ион, который не имеет цвета.

Красители и морилки можно разделить на 2 группы: основные и кислотные. Если цвет
часть красителя находится в положительном ионе, как в приведенном выше случае, это называется
базовый краситель (примеры: метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, сафранин).Если цвет
часть находится в отрицательно заряженном ионе, это называется кислотным красителем (примеры:
нигрозин, конго красный).

Рисунок 25 Прямое и непрямое окрашивание.

Из-за своей химической природы цитоплазма всех бактериальных клеток имеет
небольшой отрицательный заряд при выращивании в среде с почти нейтральным pH.
Следовательно, при использовании основного красителя положительно заряженная цветная часть
краситель сочетается с отрицательно заряженной бактериальной цитоплазмой (противоположные заряды
притягивать), и организм сразу окрашивается.

Кислый краситель из-за своей химической природы реагирует иначе. Поскольку цвет
часть красителя находится на отрицательном ионе, он не будет легко соединяться с
отрицательно заряженная бактериальная цитоплазма (как заряды отталкиваются). Вместо этого он формирует
накапливаются вокруг организма, оставляя сам организм бесцветным. Поскольку
организм виден косвенно, такой вид окрашивания называется непрямым или отрицательным,
и используется, чтобы получить более точное представление о размерах, форме и размерах бактерий.
распоряжения.

Попробуйте как прямое, так и непрямое окрашивание нескольких микроорганизмов.

Прямое окрашивание с использованием основного красителя
При прямом окрашивании положительно заряженная цветная часть основного красителя объединяет
с отрицательно заряженной бактерией, и организм сразу становится
окрашенный.

Организмы
Ваши чистые культуры Staphylococcus epidermidis (кокк со стафилококком
расположение) или Micrococcus luteus (кокк с расположением тетрады или сарцины)
и Escherichia coli (малая палочка) или Enterobacter aerogenes (малая палочка).

Процедура

  1. Выполните тепловую фиксацию мазка на Escherichia coli или Enterobacter aerogenes следующим образом:
    1. Используя бутылку-капельницу с дистиллированной водой, найденную на стойке для красок,
      поместите небольшую каплю воды на чистое предметное стекло, прикоснувшись к пипетке
      к слайду.
    2. Асептически удалите небольшое количество культуры с поверхности агара
    3. Сожгите оставшиеся бактерии с петли.(Если добавлено слишком много культуры
      в воду, вы не увидите окрашенных отдельных бактерий.)
    4. Используя петлю, распределите подвеску по всему слайду, чтобы получился
      тонкая пленка.
    5. Дайте этой тонкой суспензии полностью высохнуть на воздухе.
    6. Пропустить слайд (пленкой вверх) через пламя горелки Бунзена 3
      или 4 раза термически закрепить.
  2. Поместите предметное стекло на лоток для окрашивания и покройте всю пленку сафранином.Окрашивать 1 минуту.
  3. Возьмите предметное стекло за один конец и держите его под углом над лотком для окрашивания.
    Используя промывочную бутылку на столе, аккуратно смойте излишки сафранина.
    со слайда. Также смойте пятно, попавшее на дно предметного стекла.
  4. Используйте промокательную бумагу, чтобы промокнуть предметное стекло. Соблюдайте правила использования масла
    иммерсионная микроскопия.
  5. Приготовьте вторую прямую, на этот раз используя либо Staphylococcus epidermidis, либо
    Micrococcus luteus как организм.

    1. Термофиксируйте мазок Micrococcus luteus или Staphylococcus epidermidis по
      следуя инструкциям в шаге 1.
    2. Окрашивать метиленовым синим в течение 1 минуты.
    3. Смыть излишки метиленового синего водой.
    4. Промокните и просушите с помощью иммерсионной микроскопии в масле.
  6. Приготовьте третий слайд с изображением нормальной флоры и клеток полости рта.
    1. С помощью стерильного ватного тампона энергично соскоблите внутреннюю часть рта.
      и десны.
    2. Протрите предметное стекло тампоном (не используйте воду), просушите на воздухе и зафиксируйте нагреванием.
    3. Окраска кристально-фиолетовым на 30 секунд.
    4. Смыть излишки кристаллического фиолетового водой.
    5. Промокните насухо и наблюдайте. Найдите эпителиальные клетки с помощью вашей 10-кратной цели,
      центрируйте их в поле и погружайте в масло, чтобы наблюдать
      бактерии нормальной флоры на эпителиальных клетках и вокруг них.

Непрямое окрашивание с использованием кислотного красителя
При отрицательном окрашивании отрицательно заряженная цветная часть кислотного красителя
отталкивается отрицательно заряженной бактериальной клеткой.Следовательно, фон будет
окрасится, и клетка останется бесцветной.

Организм
Ваша чистая культура Staphylococcus epidermidis или Micrococcus luteus .

Процедура

  1. Поместите небольшую каплю нигрозина на чистое предметное стекло.
  2. Добавьте небольшое количество Staphylococcus epidermidis или Micrococcus, соблюдая правила асептики.
    luteus
    к красителю и аккуратно перемешайте петлей Используя край другого предметного стекла, распределите смесь с переменным давлением.
    поперек слайда так, чтобы светлые и темные участки чередовались.Делать
    убедитесь, что краситель не слишком густой, иначе вы не увидите бактерий!
  3. Дайте пленке окрашенных бактерий полностью высохнуть на воздухе на предметном стекле. Не термофиксируйте
    и не смывать краситель.
  4. Наблюдать с помощью иммерсионной микроскопии в масле. Найдите область, в которой нет ни того, ни другого
    много или слишком мало красителя (светло-фиолетовая область там, где свет
    проходит через слайд). Если краситель слишком густой, пропускается недостаточно света
    через; если краситель слишком тонкий, фон будет слишком светлым для достаточного
    контраст.

Результаты
Нарисуйте 3 ваших препарата для прямого окрашивания и ваше непрямое пятно
подготовка.

Рабочие характеристики
Введение в окрашивание
Опишите процедуру термофиксации

  1. Определите следующее: кислотный краситель, основной краситель, прямое окрашивание и непрямое окрашивание.
  2. Опишите химическими и физическими терминами принцип прямого окрашивания.
    и принцип непрямого окрашивания.

Прямое окрашивание
Процедура

  1. Перенос небольшого количества бактерий с поверхности агара или бульонной культуры
    на предметное стекло и закрепите препарат термически.
  2. Подготовьте прямое пятно, когда у вас будут все необходимые материалы.

Результаты
Распознать препарат прямого окрашивания при наблюдении под микроскопом,
и описать форму и расположение организма.

Процедура непрямого окрашивания

  1. Выполните непрямое окрашивание при наличии всех необходимых материалов.
  2. Объясните, почему краситель не смывается при нанесении непрямого окрашивания.

Результаты
Распознать препарат непрямого окрашивания при наблюдении под микроскопом,
и описать форму и расположение организма.
.

Оставьте комментарий